Trazabilidad metrológica de un estándar secundario a un estándar primario de ciclosporina para pruebas de biodisponibilidad

Metrological traceability of a secondary standard to a primary cyclosporine standard for biodability tests

Trigo Orsini Myriam Lina¹ Condori Espinoza Alejandra Silvia *
1. Jefe de Laboratorio Control de Calidad de Medicamentos y Biodisponibilidad del Instituto de Servicios de Laboratorio de Diagnostico e Investigación en Salud - SELADIS, Universidad Mayor de San Andrés, Av. Saavedra 2224. La Paz, Bolivia. ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0874-4093
* Auxiliar de Investigación, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, Universidad Mayor de San Andrés, Av. Saavedra 2224. La Paz, Bolivia* mylitrigo@gmail.com ORCID:https://orcid.org/0000-0002-2251-0218 ]]> Fecha de Recepción: 15 Julio 2020 Fecha de Aceptación: 10 Agosto de 2020

Resumen

Introducción: El proceso de trazabilidad metrológica de un estándar secundario a uno primario es una propiedad del resultado de una medición o del valor de un estándar, por la cual se puede relacionar a referencias establecidas, usualmente nacionales o internacionales, a través de una cadena ininterrumpida de comparaciones, todas las cuales tienen incertidumbres determinadas.

Objetivo: Realizar la trazabilidad de un estándar secundario a uno primario de ciclosporina y de esta manera asegurar la calidad y pureza del mismo.

Métodos: Se utilizaron los siguientes métodos: descripción organoléptica, solubilidad, identificación y cuantificación por Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) en fase reversa.

Resultados: El estándar secundario de ciclosporina, cumplió con todas las especificaciones referidas a descripción organoléptica, solubilidad, identificación y se obtuvo una pureza de 97,5% utilizando un estándar primario cuyo título es de 98,5 %.

Conclusión: Se realizó la trazabilidad metrológica de un estándar secundario a un estándar primario para poder utilizarlo como estándar de trabajo, garantizando el título del mismo. Esta propiedad es uno de los pilares para que los resultados de medida sean comparables entre sí, independientemente del lugar y tiempo en el que se hayan realizado, facilitando su aceptación universal y reduciendo las potenciales barreras técnicas al comercio.

Palabras Claves

Abstract

Introduction: The metrological traceability process from a secondary standard to a primary one is a property of the result of a measurement or the value of a standard, by which it can be related to established references, usually national or international, through an uninterrupted chain of comparisons, all of which have certain uncertainties.

Objective: To carry out the traceability of a secondary standard to a primary one of cyclosporine and in this way to ensure its quality and purity.

Methods: The following methods were used: organoleptic description, solubility, identification and quantification by reversed phase High Performance Liquid Chromatography (HPLC).

Results: The secondary cyclosporine standard met all the specifications referred to organoleptic description, solubility, identification and a purity of 97.5% was obtained using a primary standard whose titer is 98.5%.

Conclusion: The metrological traceability of a secondary standard to a primary standard was carried out in order to be able to use it as a working standard, guaranteeing its title. This property is one of the pillars for the measurement results to be comparable with each other, regardless of the place and time in which they have been carried out, facilitating their universal acceptance and reducing potential technicalbarriers to trade.

Keywords

Traceability, cyclosporine, primary standard, secondary standard, bioavailability.

INTRODUCCIÓN

El proceso de trazabilidad metrológica de un estándar secundario a uno primario es una propiedad del resultado de una medición o del valor de un estándar, por la cual se puede relacionar a referencias establecidas, usualmente nacionales o internacionales, a través de una cadena ininterrumpida de comparaciones, todas las cuales tienen incertidumbres determinadas; de esta manera se buscará un procedimiento adecuado para el análisis, obteniendo un estándar secundario trazado asegurando la calidad y pureza del mismo, para así poder utilizarlo como estándar de trabajo.

Sustancia química de referencia primaria

Una sustancia química de referencia primaria designada es aquella en la que se reconoce de forma generalizada que está dotada de las cualidades apropiadas en un contexto especificado y cuyo valor se acepta sin necesidad de comparación con otra sustancia química.

Sustancia química de referencia secundaria

Una sustancia química de referencia secundaria es aquella sustancia cuyas características se asignan o calibran por comparación con una sustancia química de referencia primaria. El alcance de la caracterización y las pruebas de una sustancia química de referencia secundaria puede ser menor que para una sustancia química de referencia primaria. Esta definición puede aplicarse, entre otras cosas, a algunas sustancias denominadas "patrones de trabajo".

Importancia de la trazabilidad

Permite la comparación entre los resultados a través del tiempo y el lugar:

]]>

Entre laboratorios de mediciones

Entre industrias y sectores de aplicación

Entre países

Entre el presente y el futuro

Aumenta la confiabilidad de los resultados

Pasos importantes para obtener trazabilidad

1.   Definir el mesurando (cantidad que se desea medir analito + matriz) y establecer unidades de medición

]]> 2.   Identificación de equipos, materiales y reactivos que se usarán para las mediciones con sus correspondientes especificaciones.

3.   Identificar las condiciones experimentales dadas en el método (temperatura, tiempo, etc.) y su influencia en el resultado.

4.   Obtener materiales de referencia apropiados.

Ciclosporina

Es un fármaco inmunosupresor ampliamente usado en el trasplante de órganos, con el fin de reducir la actividad del sistema inmunitario.

Estructura química

Fig. 1. Estructura química de la ciclosporina

Mecanismo de acción

La ciclosporina disminuye la respuesta inmunitaria celular, inhibiendo la producción de anticuerpos T-dependientes. También inhibe la producción y liberación de linfocinas, incluyendo interleucina 2.

Trasplante de órganos: Oral, inicio: 10-25 mg/Kg/día en 2 dosis, durante 12 horas antes del trasplante y mantener 1 a 2 semanas: mantenimiento 2-6 mg/Kg/día en 2 dosis en administración con otros inmunosupresores: 3-6 mg/Kg/día en 2 dosis

Perfusión IV (2 - 6h) 1/3 dosis mg/Kg/día oral.

Contraindicaciones

Hipersensibilidad a la ciclosporina. Enfermedades autoinmunes con alteración de la función renal (excepto proteinuria en pacientes con síndrome nefrótico), hipertensión arterial (HTA) no controlada.

Pacientes con psoriasis que están recibiendo otros inmunosupresores y radioterapia.

Interacciones.

Antibióticos macrólidos, ketoconazol, fluconazol, verapamilo, metoclo-pramida, metilprednisolona, alopurinol, amiodarona, inhibidores de la proteasa, colchicina, barbitúricos, carbamazepina, fenitoína, aminoglucósidos, naproxeno, diclofenaco, metotrexato.

Biodisponibilidad aumentada por ingesta concomitante de zumo de pomelo.

Reacciones adversas.

MATERIALES Y MÉTODOS

Acetonitrilo calidad HPLC, Ácido fosfórico para análisis, Agua grado HPLC

Los equipos utilizados fueron: Balanza analítica, con una sensibilidad de 0,1 mg; Cromatógrafo Líquido de Alta Resolución

Material de laboratorio: matraces volumétricos, pipetas volumétricas, vasos de precipitados y otros

Procedimientos de Trabajo

Pruebas para trazabilidad metrológica de ciclosporina de un estándar secundario a un estándar primario:

]]> •    Características organolépticas

•    Solubilidad

•    Pérdida por secado

•    Identificación

•    Cuantificación

1.   CARACTERÍSTICAS ORGANOLEPTICAS

Definir las características organolépticas: Color, olor, aspecto y forma de partícula.

2.   SOLUBILIDAD

Definir la solubilidad de la ciclosporina estándar secundario en: metanol, etanol, acetona, cloroformo y agua.

3.   IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION POR HPLC

]]> IDENTIFICACION

El pico principal en el cromatograma obtenido con la solución de ensayo es similar en el tiempo de retención al pico principal del cromatograma obtenido en la solución de referencia

CUANTIFICACION

APTITUD DEL SISTEMA

Inyectar entre 6 a 10 veces la solución estándar de concentración de 625ng/ml, utilizando como solvente Acetonitrilo:Agua (50:50) y calcular:

• Precisión, expresada como el coeficiente de variación obtenido a partir de 6 a 10 inyecciones repetidas de solución de estándar de trabajo, según USP 37.

o    Parámetros cromatográficos

o    Factor de capacidad

]]> o    Número de platos teóricos (N):

o    Factor de asimetría o de cola (tailing)

Solución estándar: Preparar tres soluciones de concentración final 625ng/mL utilizando el estándar primario USP de Ciclosporina empleando Acetonitrilo:Agua (50:50) como solvente

Solución de trabajo: Preparar tres soluciones de concentración final 625ng/mL utilizando el estándar de trabajo (estándar secundario) de Ciclosporina empleando Acetonitrilo:Agua (50:50) como solvente

Las condiciones cromatográficas utilizadas fueron: Un Cromatógrafo Líquido de Alta Resolución, Agilent con bomba binaria y una separación en gradiente; con flujo de 1.4 mL/min una columna 4,6 mm x 25 cm; relleno L 7 de 5 um, marca Agilent; el detector de Arreglo de Diodos a 210 nm; temperatura de columna de 75°C y Fase móvil: acetonitrilo:agua (1:1) pH3

Cálculo para la pureza del estándar secundario

Calcular el porcentaje de ciclosporina (C62Hrn N11012) en la porción de Ciclosporina tomada:

Resultado = (ru/rs) x P x 100

]]> •    ru = área del pico de ciclosporina de la Solución muestra

•    rs = área del pico de ciclosporina de la Solución estándar

•    P = pureza de ciclosporina en ER Ciclosporina

 

RESULTADOS

1. DESCRIPCION ORGANOLEPTICA

Tabla N°1: Características organolépticas de la muestra

Fuente: Elaboración propia

2. SOLUBILIDAD

Fuente: Elaboración propia

Nota. El requisito fue obtenido de Adaptado de "cyclosporins", THE MERCK INDEX FIFTEENTH EDITION

3. IDENTIFICACION POR HPLC:

Gráfico N°1: Cromatograma del estándar primario de ciclosporina 625ng/ml

Fuente: Datos primarios del HPLC

Gráfico N°2: Cromatograma de la muestra de ciclosporina 625ng/ml (estándar secundario)

CUANTIFICACIÓN

APTITUD DEL SISTEMA CICLOSPORINA STD PRIMARIO 625(ng-ml)

CALCULO DE LA PUREZA DEL ESTANDAR SECUNDARIO

El estándar de trabajo tiene un título de 97,55%

CONCLUSIONES

De acuerdo a los resultados obtenidos se puede concluir que:

Se realizó la trazabilidad metrológica de un estándar secundario a un estándar primario de tal manera que el estándar secundario de la ciclosporina puede ser utilizado como estándar de trabajo, debido a que se tiene el título del mismo. Esta propiedad es uno de los pilares para que los resultados de medida sean comparables entre sí, independientemente del lugar y tiempo en el que se hayan realizado, facilitando su aceptación universal y reduciendo las potenciales barreras técnicas al comercio.

El título obtenido para el estándar secundario fue de 97,55% de pureza.

RECOMENDACIONES

Es importante realizar la trazabilidad metrológica cuando se trabaja con estándares secundarios para saber con certeza el título del estándar de trabajo, debido a que la trazabilidad metrológica garantiza que los resultados de medida sean comparables entre sí, independientemente del lugar y tiempo en que se hayan realizado facilitando el que puedan ser universalmente aceptados.

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