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Introducción
El virus SARS-CoV-2, que causó la pandemia de coronavirus 2019 (COVID-19), se identificó por primera vez en la ciudad de Wuhan, provincia de Hubei, China, en diciembre de 2019 (1). Debido a su propagación en varios países y muertes en grupos de riesgo, la Organización Mundial de la Salud (OMS) la declaró como pandemia el 11 de marzo de 2020 (2).
Para su diagnóstico, se realiza la prueba de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa en tiempo real (RT-PCR). Esto permite detectar la presencia de ARN viral y es útil durante las primeras semanas de infección y es considerada actualmente como el estándar de referencia recomendado por la Organización Mundial de la Salud (OMS) (3).
Las pruebas inmunológicas son utilizadas como diagnóstico complementario en la vigilancia epidemiológica. Las pruebas están basadas en la detección de anticuerpos de tipo IgM e IgG frente al SARS-CoV-2 presente a partir de la segunda semana de infección (3). Se emplean dos pruebas para la detección de anticuerpos IgM e IgG para el virus SARS-CoV-2: la prueba de ELISA y la prueba inmunocromatográfica (5).
La característica de la prueba inmunológica basada en inmunocromatografía tiene la capacidad de detectar anticuerpos IgM e IgG, generados como respuesta a la infección (6). Los anticuerpos IgM pueden ser detectables en la sangre después de la primera semana de iniciada la infección (etapa intermedia) y perduran por 2 o 3 semanas. Por su parte, los anticuerpos IgG son detectables en la sangre a partir de la segunda semana del inicio de los síntomas. Pueden permanecer por largo tiempo después de superada la enfermedad (7).
En Bolivia, los métodos de diagnóstico de COVID-19 habitualmente usados en los laboratorios son: a) pruebas de detección de ácidos nucleicos (PCR), b) pruebas de detección de antígeno (Ag) y c) pruebas de detección de anticuerpos (Ac) IgM/A e IgG. Algunos inconvenientes respecto a las pruebas moleculares podrían ser su alto costo que dificulta su aplicación en sectores de recursos limitados. Sin embargo, las pruebas inmunológicas son más accesibles, pero presentan diferente sensibilidad y especificidad (6).
El propósito del estudio es evaluar la prueba inmunocromatográfica para la detección de anticuerpos IgM e IgG contra el SARS-CoV-2, utilizando como prueba de referencia ELISA IgM/IgG para COVID-19.
Metodología
La investigación se caracteriza por ser de tipo descriptivo de corte transversal en el que se evaluó la prueba inmunocromatográfica ACCU-TELL COVID-19 empleando muestras clínicas recogidas durante la pandemia COVID-19. Todos los sujetos fueron confirmados como positivos y negativos para COVID-19 mediante ELISA COVID-19 IgM/IgG, considerada como prueba de referencia.
El estudio usó un muestreo no probabilístico, por conveniencia. Para la evaluación de la prueba inmunocromatográfica se incluyó muestras en las que se detectó anticuerpos IgM e IgG contra SARS-CoV-2 y muestras en las cuales no se detectaron anticuerpos. Se excluyó muestras en las que no se detectaron anticuerpos IgM e IgG contra SARS-CoV-2.
Descripción de las pruebas para la detección de anticuerpos IgM/IgG contra SARS-CoV-2:
Prueba de referencia. ELISA COVID-19 IgM, IgG: Este kit fue diseñado, desarrollado y producido para la medición cualitativa del anticuerpo IgM COVID-19 humano en suero. Este ensayo utiliza el método de “captura de IgM, IgG ” en una técnica de inmunoensayo enzimático basada en microplacas. El procedimiento de las muestras y sueros de control fueron realizados según indicaciones del fabricante de la marca Epitope Diagnostics de procedencia EE. UU. (9).
Prueba inmunocromatográfica. ACCU-TELL COVID-19 IgG/IgM: La identificación de anticuerpos IgG e IgM, fue hecha siguiendo las recomendaciones del fabricante COVID-19 IgG/IgM Rapid Test Cassette Accubiotech de procedencia China. Inicialmente, se observa una primera banda (control) para asegurar la correcta realización de la prueba. Una característica respecto a la lectura son los 10 minutos necesarios. La sangre para la prueba serológica rápida fue obtenida por venopunción, de acuerdo a la técnica estándar (11).
El análisis estadístico incluyó la comparación de resultados obtenidos con la prueba inmunocromatográfica y los resultados obtenidos por la prueba de ELISA. Para el cálculo de los índices diagnósticos: sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP) y valor predictivo negativo (VPN) (12). Se elaboró una tabla de contingencia 2x2. Se utilizó el programa SPSS Statics (Versión 26.0) para determinar el índice de kappa. La interpretación de los valores del índice kappa se realizó según las recomendaciones de Landis y Koch: concordancia pobre =0, leve entre 0 y 0,20, baja entre 0,21 y 0,40, moderada entre 0,41 y 0,60, buena entre 0,61 y 0,80, casi perfecta entre 0,81 y 1,00 (13).
Resultados
Se evaluó una prueba inmunocromatográfica (ACCU-TELL COVID-19 IgG/IgM) dirigida a la detección de anticuerpos IgM e IgG anti-SARS-CoV-2, empleando como prueba de referencia prueba ELISA COVI-19 IgM/IgG. Con referencia a la detección de anticuerpos IgM, de un total de 50 muestras, la prueba inmunocromatográfica detectó anticuerpos IgM en 31 muestras y en 19 muestras no se detectaron anticuerpos. La prueba de ELISA COVID-19 IgM detectó en 19 muestras anticuerpos IgM y en 31 muestras no se detectó anticuerpos (Tabla 1).
Tabla 1 Desempeño diagnóstico de la prueba inmunocromatográfica IgM en comparación con prueba de ELISA IgM como prueba de referencia.
Fuente: Elaboración propia
Para la detección de anticuerpos IgG, de un total de 50 muestras incluidas, la prueba inmunocromatográfica detectó anticuerpos IgG en 24 muestras y en 26 muestras no se detectó anticuerpos. La prueba de ELISA COVID-19 IgG detectó en 25 muestras anticuerpos IgG y en 25 muestras dieron negativos (Tabla 2).
Tabla 2 Desempeño diagnóstico de la prueba inmunocromatográfica IgG en comparación con prueba de ELISA IgG como prueba de referencia
Fuente: Elaboración propia
La sensibilidad de la prueba Inmunocromatográfica evaluada para la detección de anticuerpos IgM presentó una sensibilidad de 78,95 % y una especificidad de 48,39 %. En cuanto a la prueba inmunocromatográfica para la detección de anticuerpos IgG, presentó una sensibilidad 72,00 % y especificidad de 76,00 % (Tabla 3).
Tabla 3 Resultados diagnósticos y rendimiento de la prueba inmunocromatográfica IgM/IgG
Fuente: Elaboración propia
La concordancia entre la prueba inmunocromatográfica para la detección de anticuerpos IgM y la prueba de ELISA para la detección de anticuerpos IgM es de 0,24 con IC (intervalo de confianza) de 95 % (-0,01 a 0,50), que indica una concordancia regular o razonable. En cuanto a la concordancia entre la prueba Inmunocromatográfica para la detección de anticuerpos IgG y la prueba de ELISA para la detección de anticuerpos IgG es de 0,48 con IC (intervalo de confianza) de 95 % (0,24 a 0,72), que indica una concordancia moderada.
Discusión
Las pruebas comerciales para la detección de anticuerpos IgM/IgG contra SARS-CoV-2 varían en sensibilidad y especificidad. La sensibilidad de las pruebas varía entre 40 % y 93 %, y la especificidad entre 93 % y 100 %. Por ello, la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Organización Panamericana de la Salud (OPS) recomiendan la validación y evaluación del rendimiento de dichas pruebas (14).
Si bien las pruebas para la detección de anticuerpos contra SARS-CoV-2 son consideradas adecuadas para la vigilancia, predicción del resultado de la enfermedad y la investigación epidemiológica; no son las indicadas para el diagnóstico clínico temprano (15).
Las pruebas inmunocromatográficas son de fácil aplicación y los resultados se obtienen de manera rápida, motivo por el cual son de ayuda en el diagnóstico de COVID-19. Sin embargo, muestran resultados falsos, negativos o positivos. Las pruebas de ELISA COVID-19, que se utilizaron como referencia, determinan anticuerpos, al igual que las pruebas inmunocromatográficas. La mayoría de los estudios realizados para la validación de la prueba inmunocromatográfica, emplean la prueba de RT-PCR como referencia. La mencionada prueba tiene la capacidad de determinar el material genético del virus en las muestras biológicas 6.
La sensibilidad en la prueba inmunocromatográfica evaluada para la detección de anticuerpos fue de 78,95 % para IgM y 72 % para IgG. Se detectó 4 falsos negativos para la detección de anticuerpos IgM y 7 falsos negativos para la detección de anticuerpos IgG. Es posible que la aparición de falsos negativos se dé a causa de bajas concentraciones de anticuerpos IgM/IgG (15).
La especificidad de la prueba inmunocromatográfica evaluada para la detección de anticuerpos contra SARS-CoV-2, mostró 48.39 % para IgM y 76 % para IgG. Se detectó 16 falsos positivos para la detección de anticuerpos IgM y 6 falsos positivos para la detección de anticuerpos IgG.
Un estudio realizado por Pegoraro et al, comparó los resultados de tres pruebas inmunocromatográficas rápidas (TIC) con los obtenidos con dos inmunoensayos automatizados para evaluar su utilidad (16). Los ensayos demostraron del 41 % al 45 % de sensibilidad diagnóstica y del 91 % al 98 % de especificidad. Si bien los resultados de ambos estudios son diferentes, se observa que tanto la especificidad como la sensibilidad no son tan elevadas como las obtenidas con referencia a la RT-PCR.
El estudio de Zhengtu et al, indagó el desarrollo y aplicación clínica del test rápido IgG-IgM combinado para SARS-CoV-2 en la infección diagnóstica. La sensibilidad fue de 88.66 % y la especificidad de 90,63 %. El presente estudio encontró una sensibilidad y especificidad menor, aunque las determinaciones de ambos anticuerpos se hicieron por separado y con la prueba de RT-PCR como referencia (17).
De manera similar, los resultados de Vizcaíno et al. muestran una especificidad de 91 % y del 100 % para IgM e IgG respectivamente y una sensibilidad de 100 % para ambas pruebas, en una investigación de COVID-19 para la detección de anticuerpos IgM/IgG por ensayo inmunocromatográfico (6).
En nuestro estudio se encontró que los anticuerpos detectados en el suero a través del ensayo inmunocromatográfico pueden ser de utilidad diagnóstica para detectar las muestras positivas y negativas para IgG. Respecto a la IgM, la especificidad fue baja, lo que indica que no sería de utilidad en la detección de muestras negativas; pero sí en la detección de muestras positivas. Sin embargo, los fabricantes de la prueba inmunocromatográfica (ACCU-TELL COVID-19 IgG/IgM) muestra alta sensibilidad y especificidad (11).
La concordancia entre la prueba inmunocromatográfica y la prueba de ELISA COVID-19 para la detección de anticuerpos IgM es regular o razonable entre ambas pruebas. La concordancia entre la prueba inmunocromatográfica y la prueba de ELISA COVID-19 para la detección de anticuerpos IgG es moderada entre ambas pruebas.
La evaluación de la prueba inmunocromatográfica para la detección de anticuerpos IgM e IgG contra SARS-CoV-2 demostró la sensibilidad y especificidad de ambos tipos de anticuerpos, encontrándose que estas pruebas son de utilidad por su aplicación rápida. Sin embargo, deben ser confirmadas por otras pruebas de referencias como ELISA o RT-PCR, dependiendo de la situación clínica del paciente.
