Ubicación de la zona de estudio

La investigación realizada fue de carácter experimental la cual se realizó entre el temporal de octubre/2018 y abril/2019, en una finca situada en la localidad de Colón (Longitud: O 80º24'47'', Latitud: S 1º6'47'') perteneciente al cantón Portoviejo (Ecuador) que se caracteriza por una precipitación media anual 450 mm y una temperatura median anual de 25.5 °C (^{INAMHI, 2019}) (Figura 1).

Figura 1 Área de estudio, Parroquia Colón del cantón Portoviejo de la provincia de Manabí Ecuador. 

En cuanto a los procedimientos se destaca que dentro de un invernadero se instaló una jaula entomológica de 8 m³ (2x2x2) cubierta de tela con orificios de ventilación extremadamente estrechas que impedían la entrada y salida de organismos, en su interior se colocaron 150 plantas de limón sutil compradas en un vivero del sector, las plántulas inmediatamente se sometieron al corte apical a una altura de 50 cm estimulando la emisión uniforme de nuevos brotes libres de P. citrella (^{Bautista, 1997}). A los 15 días después del corte apical las plantas habían desarrollado brotes de 5 a 8 cm, ideales para la infestación natural del minador de hoja, después de lo cual se aplicaron los tres tratamientos empleando unas aspersora de mochila con boquilla de cono. Inmediatamente después de la aplicación de los tratamientos las plantas fueron llevadas a la plantación donde se distribuyeron en repeticiones con sus tratamientos por espacio de ocho días, periodo necesario para permitir la oviposición y desarrollo larval del minador. Luego de este tiempo las plantas se trasladaron a jaulas para realizar las evaluaciones finales y suprimir el riesgo de depredación de larvas de minador.

El experimento se realizó en dos épocas, siendo la primera la época de lluvia (marzo-abril) y la segunda la época seca (octubre-noviembre). En cada caso, se usó un Diseño Completamente al Azar (DCA) con 3 tratamientos [T1: extracto acuoso de neem (EAN) (50 g L^-1 de agua), T2: aceite de neem (AN) (10 ml L^-1 de agua), T3: testigo (T) (sin aplicación)] y cinco repeticiones. Para el tratamiento con extracto acuoso se colectaron y molieron 50 gramos de hojas del árbol de neem en un molino artesanal, después se las puso en reposo con agua por 24 horas previo a la aplicación del tratamiento, luego la solución fue cernida por tres ocasiones para evitar el taponamiento de la aspersora de mochila. Respecto al segundo tratamiento se empleó el insecticida comercial Neem-X (concentrado emulsionable) cuyo ingrediente activo es la azadirachtina obtenida del aceite de semillas de neem.

Después de la aplicación de los tratamientos en 10 plantas por tratamiento se realizaron evaluaciones a los 10, 15 y 20 días, considerando un brote tierno por planta. Siguiendo las recomendaciones de ^{Cañarte (2001}).

En cuanto a las variables en estudio se analizaron porcentaje de infestación, mortalidad y parasitoidismo en P. citrella, con los datos, se realizó la Prueba de Dunnet con nivel de confianza de 95 y 99 %. A continuación, se detallan las fórmulas para cada una de las mismas en las Ecuaciones 1, 2 y 3 (^{Castaño, 1996}).

Tasa global de infestación, mortalidad y parasitoidismo

A continuación, se detallan los principales hallazgos en Manabí, Ecuador donde se evaluaron bioinsecticidas a base neem contra el minador de la hoja de los cítricos P. citrella Stainton y el efecto en sus parasitoides en condiciones contraladas empleando una jaula entomológica en las época seca y lluviosa.

Figura 2 Comparación de infestación, mortalidad y parasitoidismo para P. citrella en estación seca y lluviosa, Colón, Portoviejo, Ecuador 

Un análisis global de todos los tratamientos utilizados en la Figura 2, muestra que la frecuencia en la infestación de P. citrella en la época de lluvia (26.6 %) fue tres veces superior que en estación seca (8.8 %). En cuanto a la mortalidad, se observó que el periodo de lluvia (7.6 %) fue casi el doble que el periodo seco (1.7 %). Finalmente se puede enriquecer el análisis acotando que existió un amplio dominio de los valores correspondientes a la época lluviosa para todas las tasas tribuidas en gran parte a que el insecto plaga y sus parasitoides se reprodujeron con mayor intensidad.

Tasa de infestación, mortalidad y parasitoidismo en estación seca

El tratamiento con extracto acuoso reporto el valor más bajo en cuanto a porcentaje infestación de P. citrella evaluado a los 10 DDA (7.11 la tasa de mortalidad de P. citrella (6 %) fue la media con mejores resultados a los 10 DDA, el parasitoidismo en general resultó bajo sobresaliendo la evaluación 20 DDA con (2 %). Siguiendo el orden, se sitúa el T2 (aceite de neem), que obtuvo (21.86 %) a los 10 DDA como tasa de infestación más elevada, a los 15 DDA la mortalidad alcanzó su tope con (9.14 %), el parasitoide A. citricola tuvo mayor actividad a los 20 DDA registrando (9.5 %). También, para testigo absoluto sobresalió (10.71 %) de infestación a los 15 DDA, sin embargo, la tasa de mortalidad llegó a su pico con (2.5 %) durante el registro de 20 DDA, la media de parasitoidismo presentó registros extremadamente bajos en las fechas luego de la aplicación alcanzando promedios de cero (Tabla 1).

En cuanto a la confrontación de los tratamientos tomando como media las variables biológicas en diferentes momentos de evaluación durante la época seca, se observó una diferencia significativa en el porcentaje de infestación por P. citrella a los 10 DDA en al menos dos medias con p-valor 0.030. En múltiples comparaciones se observó que, a pesar de la aplicación del plaguicida botánico, éste presentó una mayor tasa de infestación con (21.86 %) en comparación el testigo absoluto con (8.66 %) (Tabla 1). Este evento contradice lo reportado por ^{Navarrete et al. (2017}) donde afirma que las aplicaciones de Neem redujo las poblaciones de huevos, ninfas y adultos de los insectos plaga.

Siguiendo con la misma variable porcentaje de infestación a los 15 DDA al menos dos medias también mostraron diferencias significativas con un p- valor 0.030; en este caso las comparaciones múltiples mostraron una diferencia media de (2.45 %) entre el extracto acuoso de Neem y el testigo absoluto cuyo promedio fue (10.71 %) y aceite de Neem con (18.35 %); lo que quiere decir que dicho extracto erradicó más cantidad de especímenes de P. citrella (Tabla 1).

En cuanto al parasitoidismo de P. citrella, solamente se reportó la presencia de Ageniaspis citrícola parasitando larvas P. citrella en la localidad de Colón tanto en época seca como en la estación lluviosa, cumpliéndose con la premisa de la especificidad del parasitoidismo establecida por ^{Schmutterer (1997}) donde cada fitófago tiene su insecto que lo controla. Los resultados, a los 20 días de evaluación, mostraron diferencias significativas en al menos dos medias con p-valor 0.029, en la comparación múltiple se observó que las diferencias eran entre en aceite de Neem con (28.07 %) y el testigo absoluto con promedio de 0.00 lo que indica que el insecticida natural no interfirió en la actividad y ciclo biológico del parasitoide debido a su mayor actividad (Tabla 1). Respecto a la mortalidad de P. citrella durante la época seca no hubo diferencias estadísticas en las tres evaluaciones, pero sí en cuanto a los promedios quedando en evidencia que los tratamientos con los bioplaguicidas en conjunto con el parasitoidismo sobresalieron por eliminar de mejor manera al fitófago minador.

Un hecho importante a destacar en cuanto a la infestación correspondiente en la tabla 1 fue que T2 obtuvo valores superiores que el T1 y T3 a los 10 y 15 DDA (21.86 y 18.35 %), esto debido a que el brote evaluado presentó un área foliar extensa, lo que se tradujo en mayor cantidad de área para ovipositar por parte del adulto de P. citrella desencadenando luego de la eclosión de mayor número de larvas pertenecientes al minador, pero en la evaluación 20 DDA la situación cambia y T2 (1.75 %) sobresalió por ser el tratamiento con menores tasa de infestación en relación al resto de tratamientos debido a que los parasitoides al encontrar hospedantes en las primeras evaluaciones correspondientes a porcentaje de parasitoidismo (0.57 y 1.62 %) se reprodujeron y se alimentaron de las larvas de P. citrella provocando su muerte y por consiguiente reduciendo la infestación del insecto plaga en mención y elevando la tasa de parasitoidismo (9.5 %) a los 20 DDA. En cuanto a este evento relacionado con la tasa parasitoidismo, se contrapone a ^{Schmutterer (1990}) y ^{Brechelt y Fernández (1995}) quienes señalaron que el parasitoide también se veía afectado cuando absorbía azadirachtina de su hospedante.

Tabla 1 Efecto de los tratamientos sobre P. citrella y su parasitoidismo en estación seca, Colón, Portoviejo, Ecuador. 

Letras diferentes, dentro de las filas, señala diferencias estadísticas entre tratamientos; * = nivel de significancia al 5 %.

Tasa de infestación, mortalidad y parasitoidismo en estación lluviosa

En cuanto a las medias de las variables analizadas de la Tabla 2 se estableció que el extracto acuoso alcanzó 32.76 %, valor mayor en cuanto a infestación a los 20 DDA, la mortalidad de P. citrella con 18.87 % fue la media con mejores resultados a los 15 DDA, el parasitoidismo en general resultó bajo sobresaliendo la evaluación 20 DDA con 10.29 %. En secuencia, el tratamiento con aceite de Neem que obtuvo 41.08 % a los 20 DDA como tasa de infestación más elevada, a los 20 DDA la mortalidad obtuvo el valor más alto con 13.5 %, el parasitoide A. citricola tuvo mayor actividad a los 20 DDA registrando 7.65 %. También, para testigo absoluto sobresalió en 38.15 % de infestación a los 15 DDA, sin embargo, la tasa de mortalidad llegó a su pico con 4 % durante el registro de 20 DDA, la media de parasitoidismo presentó registros promedio con rango de 2 a 7 % distinguiéndose 20 DDA con 7.52 %.

En cuanto a la época de lluvia, se observó diferencias significativas en al menos dos medias en la infestación de P. citrella a los 15 días de evaluación con p-valor 0.027, donde las pruebas múltiples mostraron la diferencia entre aceite de Neem (15.66 %) con respecto al testigo absoluto (38.15 %); es decir que existió un mejor control sobre la población de P. citrella por parte del aceite (Tabla 2). Situación que respalda ^{Cañarte (2001}) al establecer que para porcentaje de infestación usando Neem sobre MHC se alcanzó con aceite de Neem (18.41 %) comparado con (47.49 %) el testigo, además coincidiendo con ^{Zhang et al. (1994}) donde afirman que se puede lograr tasas de infestaciones inferiores al 10 % con la aplicación semanal de aceite de Neem en concentración de 1.4 % mientras el testigo un 97 %.

Asimismo, en la anterior evaluación se observó diferencias en el promedio de mortalidad con p-valor 0.004, las mismas se dieron entre el extracto acuoso de neem (18.87 %) comparado con el testigo absoluto (2.40 %) y aceite de Neem, dicha situación sirvió para establecer que los individuos de P. citrella resultaron más susceptibles a ese tipo de presentación botánica (Tabla 2).

Al efectuar las observaciones a los 20 DDA se determinó diferencias estadísticas para la mortalidad con p-valor 0.048, éstas fueron entre extracto acuoso de Neem (18.71 %) y testigo absoluto (4 %), lo que confirma que las muertes de la P. citrella fueron más efectivas en el tratamiento extracto acuoso, situación se ve respaldada por (^{Bautista, 1997} y ^{Cañarte, 1998}) quienes afirman tasas de mortalidad entre (70 y 80 %) en evaluaciones a los tres y 12 DDA. No se presentaron diferencias significativas en parasitoidismo en ninguna de las tres fechas de evaluación (Tabla 2). Sin embargo, la respuesta del testigo siempre fue menor que el extracto y aceite, hallazgo que es contrario a lo establecido por los profesionales ^{Hoelmer y Yokomi (1990}) y Cañarte (2001) donde se indica que el Neem interfiere con la longevidad parasítica y la emergencia de estos organismos al presentar el testigo sin aspersiones tasas más elevadas de actividad del insecto parasitoide (50-65 %).

En la Tabla 2 se muestra un dato interesante en cuanto a la infestación que el T2 fue el que evidencio menor tasa de infestación a los 10 y 15 DDA (8.32 y 15.66 %) en comparación al T1 y T3, esto se debe a la formulación industrial mejorada con base en aceite de neem, pero en la evaluación 20 DDA la situación cambió y T2 (41.08 %) sobresalió por una mayor infestación que el resto de tratamientos debido a un leve incremento en el área foliar del brote evaluado lo que desencadenó en un aumento de larvas de P. citrella. Además, para todos los tratamientos durante la evaluación de 20 DDA se notó un aumento importante entre un rango de dos a diez puntos porcentuales para la tasa de parasitoidismo debido a la facilidad para encontrar más hospedantes por haber desaparecido el efecto de los insecticidas botánicos y la consiguiente proliferación de larvas de minador.

Tabla 2 Efecto de los tratamientos sobre P. citrella y su parasitoidismo en estación lluviosa, Colón, Portoviejo, Ecuador. 

Letras diferentes, dentro de las filas, señala diferencias estadísticas entre tratamientos; * = nivel de significancia al 5 %; ** = nivel de significancia al 1 %.

Se observó que el control del insecto plaga en la localidad de Colón donde ser realizo la aplicación con los tratamientos del insecticida botánico, sin embargo, los datos relacionados con el parasitoidismo no se manifestaron tan contundente en su contabilización a pesar que se mostró levemente promisoria, aspecto respaldado por ^{Mohamed et al. (2014}).

El extracto acuso de neem tuvo mayor efecto sobre las poblaciones de P. citrella independientemente de la estación climática, a pesar de no tener una consistencia aceitosa que contribuye a disminuir la movilidad de los insectos, hallazgo respaldado por ^{Fundación Natura (1992}) donde se señala que en diferentes ensayos se ha usado con éxito la dosis empleada de aceite de Neem en la presente investigación. También se puede acotar que la actividad biológica de los minadores es siempre más intensa en un clima tropical que en climas templado hecho respaldado por ^{Schmutterer (1990}) el cual estableció que en presencia de calor constante en zonas ecuatoriales la reproducción del insecto plaga estudiado aumenta en conjunto con su parasitoidismo.

Cabe señalar que el aceite de neem con sus dos tratamientos tuvo una leve influencia en la disminución de la infestación del minador en las hojas de limón debido a sus propiedades insecticidas, situación respalda por investigaciones en las cuales se afirma que una de las ventajas del uso del neem en el control de plagas es poseer varios mecanismos de acción como regulador del crecimiento, antialimentario, repelente, antiovipositor, reductor de la fecundidad e interruptor de la comunicación sexual comprobando su eficacia contra al menos 106 especies de insectos-plaga (^{Cañarte, 2002}; Cañarte, 2001).