Introducción

La población ganadera bovina en el Perú está constituida aproximadamente por 5 millones, 78 % se encuentra en la Sierra, más de la mitad (70 %) está en manos de pequeños y medianos productores, la raza predominante, la Criolla, con cruces con la raza Brown Swiss¹. Esta raza tiene un rol económico importante, al ser fuente de sustento de trabajo, alimento proteico de origen animal, ahorro familiar en zonas altitudinales, donde otras razas no producen eficientemente^2-4.

Los vacunos Criollos por más que sean utilizados para un triple propósito, carne, leche y trabajo, al ser comparados con otras razas como Holstein y Brown Swiss tienen desventaja, sin embargo, su fortaleza radica en la adaptación al medio ambiente, menor exigencia alimenticia, longevidad, resistencia a condiciones adversas y mayor fertilidad^1,5. Esta alta fertilidad puede ser aprovechada con mayor eficiencia mediante el uso de biotecnologías reproductivas, generando un mayor avance genético al incrementar la intensidad de selección a partir del macho mediante la inseminación artificial (IA) y de la hembra con la transferencia de embriones (TE), en ambos, es necesario el uso de protocolos de sincronización de celo (SC) con diferentes hormonas sintéticas⁶.

La SC tiene como finalidad generar una nueva onda folicular en un inicio, para luego sincronizar la ovulación, en la mayoría de los protocolos utilizados en vacunos de carne y leche⁷, estas tecnologías podrían ser utilizadas en vacunos Criollos, para programar partos en épocas del año con mejores condiciones ambientales⁴, actualmente se viene complementado con la ultrasonografía, con la finalidad de determinar la morfometría de estructuras ováricas durante el proceso de SC⁸, se complementa estos hallazgos con la ultrasonografía Doppler para obtener características relacionadas con la irrigación sanguínea que presenten diferentes órganos^9,10. La necesidad de generar información sobre la fisiología reproductiva en vacunos de raza Criolla, de ahí que el objetivo del estudio fue determinar las características ultrasonográfica B mode y Doppler del folículo dominante (FD) y cuerpo lúteo (CL) en vacas Criollas sometidas a un protocolo de SC.

Materiales y métodos

Lugar de estudio y animales. El estudio fue realizado en la Estación Experimental Agraria ILLPA perteneciente al Instituto Nacional de Innovación Agraria (INIA) ubicado en el distrito de Paucarcolla en la provincia y región de Puno. Se evaluaron 15 vacas de raza Criolla provenientes de la misma Estación Experimental antes mencionada, el estudio se realizó durante la época de seca que es característica del Altiplano Peruano entre los meses de mayo a julio, los animales tenían una condición corporal regular entre 2.5 a 2.8 grados con un manejo alimenticio a base de pastos naturales.

Sincronización de celo e inseminación artificial. Este proceso fue precedido de un diagnóstico obstétrico mediante ultrasonografía, seleccionando aquellas hembras aparentemente normales (libres de aparentes problemas reproductivos, evaluadas mediante una previa evaluación ginecológica), las seleccionadas, el primer día se insertó el dispositivo CIDR^® (Progesterona en dispositivo intravaginales, Progesterona activa 10 %: 1.9 g, Zoetis, Argentina) además la aplicación de 2 mg por vía intramuscular (IM) de Estrovet^® (Benzoato de estradiol, Montana, Perú), posteriormente a los 7 días se retiró el dispositivo y se aplicó 2 mg por vía IM Prostal^® (D-Clorprostenol, Over, Argentina). Finalmente, el día 8 se aplicó nuevamente Estrovet^® 2 mg por vía IM. La inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) fue realizada el día 9 con pajillas de semen de toro de raza Fleckvieh llamado INTI proveniente del Ministerio de Agricultura y Riego, el semen poseía una motilidad total a la descongelación aproximada de 50 % y una concentración de la pajilla a 37° C por espacio de 30 a 45 s, todas las hembras fueron inseminadas con pajillas del mismo toro.

Evaluación ultrasonográfica del folículo dominante y cuernos uterinos (B mode). Fue antecedida por la limpieza de la zona perianal de las hembras para el examen, se utilizó el equipo Draminski 4Vet^® (Draminski ul. Owocowa 17, Polonia) con un transductor lineal a 6 MHz evaluando las características morfométricas del FD y cuernos uterinos los días 7 y 9 de la SC para determinar las siguientes características: i) Diámetro FD los días 7 y 9, medido en mm, ii) Tasa de crecimiento, medida en mm/día. iii) Diámetro de cuernos uterinos los días 7 y 9, medido en mm.

Todas las imágenes fueron almacenadas en un USB que posteriormente fueron analizadas, finalmente, el diagnóstico de gestación fue realizado el día 30 post IATF, para determinar la presencia o no del saco gestacional y del embrión utilizando el mismo equipo ultrasonográfico.

Evaluación ultrasonográfica del cuerpo lúteo (Doppler Color). Fue realizado el día 19 post IATF utilizando el equipo Draminski 4Vet^®, primeramen-te, identificando el CL solo con modo B para deter-minar el diámetro (mm) y volumen (mm³), segui-damente, se activó el modo Doppler Color para determinar el área vascular luteal (AVL %) que se determinó en porcentaje, una vez almacenada el cinestore (video corto de la evaluación del CL) fue analizado con el programa Image J^® en un ordenador, la metodología fue realizada según lo recomendado por Acosta et al.¹¹.

Análisis estadístico. Se realizó mediante el software estadístico Jamovi 1.6.23.0¹². Los datos fueron analizados con estadística descriptiva, determinando el promedio y desviación estándar para las características de diámetro del FD, cuernos uterinos y tasa de crecimiento del FD, además se sometió a una prueba de Student para comparar el diámetro del FD y cuernos uterinos durante los días 7 y 9 de iniciado el protocolo de SC, mientras que para las características del CL se evaluó el promedio, desviación estándar e intervalos de confianza al 95 %.

Resultados

La Tabla 1 presenta las características morfométricas en modo B de los FD de las vacas Criollas sincronizadas, además, del diámetro uterino de ambos cuernos durante los días 7 y 9 de iniciado el protocolo.

El diámetro del folículo en el día 7 post inicio del protocolo de sincronización fue de 8.69 mm mientras que el día 9 se observa un diámetro de 10.7 mm, permite observar que existió un desarrollo del folículo, comprobado con la tasa de crecimiento 1.14 mm/día. En cuanto al diámetro de los cuernos uterinos derecho e izquierdo también se observó un aumento de tamaño entre el día 7 y 9 respectivamente siendo de 11.85 a 15.32 mm para cuerno derecho y de 12.72 a 16.27 mm para cuerno izquierdo. El diámetro de cuernos uterinos aumentó de tamaño del día 7 al 9 siendo este último día para los cuernos derecho fueron de 15.32 mm e izquierdo de 16.27 mm. La tasa de crecimiento fue de 1.14 mm/día.

La Tabla 2 refiere las características morfométricas en modo B y Doppler del CL de las vacas Criollas sincronizadas con un protocolo de SC.

Figura 1 Evaluación de la ecografía Doppler Color en un cuerpo lúteo de vacas Criollas (día 19 post IA) 

Las características del CL fueron de 7.96 mm de diámetro con tamaños que fluctuaron entre 6.82 y 9.10 mm, así mismo, el volúmen del CL fue de 0.23 mm³ con intérvalos que fueron desde 0.16 a 0.31 mm³, la característica tomada con ultrasonografía Doppler fue el AVL evaluada en porcentajes siendo esta en promedio de 20.96 % con intervalos que fueron desde 13.16 a 28.76 %, todas estas características fueron determinadas con un 95 % de confiabilidad. La evaluación Doppler Color, Figura 1.

Discusión

El diámetro máximo obtenido el día 9 es similar a lo reportado en animales cruzados con animales Criollos en las mismas condiciones sincronizadas con protocolo con Progesterona alcanzando tamaño de 10.2 mm¹³ así mismo, en vacas Criollas evaluadas durante todo el ciclo estral en condiciones de altura se reportaron diámetros en época de lluvia de 11.25 mm y época de seca de 11.67 mm¹⁴, el desarrollo folicular del día 7 a 9 refleja la retroalimentación positiva tras la extracción del dispositivo con progesterona que permite el libre desarrollo del FD hasta la respectiva inseminación, en este momento se conoce que el FD aumentara el número de receptores para FSH y posteriormente de LH para continuar con la desarrollo y maduración del FD^15,16. Reportes superiores son obtenidos en condiciones de altitud de 1500 msnm en vacas criollas Blanco Orejinegro (BON) siendo estos de 14.3 mm el tamaño del FD¹⁷, la diferencia podría deberse al efecto de mayor altitud donde se realizó el presente estudio puesto que generan la mayor producción de especies reactivas de oxígenos (ERO) que están implicados en funciones reproductivas como son la maduración folicular, ovulación, esteroidogénesis, funciones del CL y luteolisis¹⁸ por tal motivo se podría obtener menores diámetros foliculares comparado con estudios realizados en menores altitudes. El diámetro del CL en vacas Criollas está relacionado con los diámetros del FD (evaluado el día 9), estos diámetros son inferiores a los reportado en vacas Brown Swiss que reportan en vacas en producción 17.92 mm y en vaquillas de 11.32 mm evaluados el día 15 post IA, mientras que en el presente estudio fue evaluado el día 19 post IA, esta diferencia puede deberse a que estas estructuras según la fisiología del ciclo estral, son estructuras en proceso de regresión, así como, a efectos raciales de la raza Brown Swiss por su mayor tamaño corporal que las vacas Criollas^17,19,20. El diámetro uterino obtenido fue inferior a los reportados en vacas Holstein de aproximadamente 460 kg de peso vivo que presentan diámetros superiores a 20 mm²¹, sin embargo, el incremento de diámetro uterino está relacionado con el incremento de los estrógenos también relacionado con la fase folicular, en dicha fase los estrógenos aumenta la irrigación sanguínea que genera un edema a nivel de cuernos uterinos que a la ultrasonografía se observan con un incremento del diámetro^22,23. La tasa de crecimiento fue similar a lo reportado en vacas cruzadas con Criollas en las mismas condiciones ambientales con un protocolo de sincronización similar reportando una tasa de 1.2 mm/día, aunque el diámetro del FD fue superior¹⁷, la tasa de crecimiento que reporto fue similar siendo de 1.05 mm/día en vacas Criollas denominadas BON, también se reporta tasas similares a lo reportado en vacas Criollas en época de seca y lluvia que fueron 1.01 mm/día y 1.0 mm/día respectivamente¹⁴. La tasa de crecimiento obtenido sugiere el desarrollo positivo que tiene el FD desde el día que se extrajo el DIB (dispositivo intrauterino bovino) hasta el día previo a la IATF que indica la acción de las hormonas gonadotropinas (FSH y LH) que producen el desarrollo del FD²⁴.

Para la evaluación del CL se evaluó su volumen observándose diferencias que fue referenciada por diversos autores, que reportaron diámetros de CL menores en vacas Criollas en comparación a otros estudios realizados en otras razas como la Holstein, teniendo las mismas razones halladas tras comparar el diámetro de CL^13,14,17,25. Además, se evaluó Doppler Color en condiciones de altitud se reportó en promedio un 20.96 % de AVL, que se interpreta como el porcentaje de irrigación sanguínea en relación al área total del CL, no existiendo alguna diferencia marcada entre aquellas vacas que quedaron preñadas y vacías respectivamente por tal motivo este porcentaje es descriptivo indicando que en vacas Criollas a los 15 días post IA o post celo reportaron un CL con una irrigación aproximada de 20.96 %, este método mide la velocidad e intensidad del flujo sanguíneo y el número de glóbulos rojos que se mueven a través de los vasos sanguíneos por min^19,26, además es necesario indicar que la coloración que el Doppler Color tiene como principio que la coloración roja son aquellos vasos sanguíneos que se están acercando hacia el transductor, mientras que la coloración azul son los vasos sanguíneos que se alejan, todo ello al momento que se realizó el examen ecográfico^25,27, comparado los resultados no se pudo reportar diferencias entre las vacas preñadas y no preñadas, debido a que el día de evaluación (19 días post IA) coincide con la regresión de CL de aquellas vacas que no pudieron quedar preñadas y en dicho proceso se ha estudiado de que antes de que ocurra la secreción de Prostaglandina F_2α existe un aumento repentino de la irrigación sanguínea^11,25 que podría ser tomada con una falso positivo (diagnosticando una vaca preñada como no preñada), así mismo, mencionan que la evaluación solo del flujo sanguíneo por ecografía Doppler fue insuficiente para diagnóstico, esta tendría que ser acompañada de evaluación de concentraciones de progesterona²⁸. Finalmente, la tasa de preñez obtenida tras la evaluación ecográfica el día 30 post IA fue 6 vacas de 15 que fueron sincronizadas que representaría un 40%.

La ultrasonografía Doppler Color en vacas Criollas. Las características ultrasonográfica B mode antes de la IA para el diámetro del FD fueron inferiores, comparada con otras razas, del mismo modo el diámetro y volumen del CL fue inferior mientras AVL de 20.96 % evaluada el día 19 post IA. Sin embargo, con el estudio se pretende determinar la morfometría de estructuras ováricas y cuernos uterinos en vacas Criollas. Finalmente, las vacas sometidas a SC alcanzaron una tasa de preñez del 40 %.