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Introducción
Las alpacas son animales domésticos que pertenecen al grupo del nuevo mundo, familia Camelidae, habitan principalmente en Sudamérica1,2, su cría constituye una fuente de ingresos para pobladores de comunidades andinas de Perú, Bolivia, Chile, Argentina y Ecuador3.
Para acelerar su mejoría genética, es necesario utilizar biotecnologías reproductivas, que incluyen entre otras, colección, evaluación y conservación del semen4.
Existen diferencias en la composición seminal, y una menor concentración de espermatozoides en los eyaculados recolectados por electroeyaculación (EE) en comparación con la vagina artificial5, e incluso la calidad espermática pos descongelación, es menor en el semen colectado por EE6. Sin embargo, es un método viable para recolectar eyaculados en machos no entrenados o de especies silvestres7.
La EE se basa en la aplicación de estímulos eléctricos en los nervios pélvicos a través de una sonda insertada en el recto, promoviendo así, conseguir la protrusión del pene, erección y, finalmente la eyaculación8.
La EE para la colección de semen de alpacas, se usó con resultados muy variables, los eyaculados tenían poco volumen (0.1 a 0.5 mL) y alta concentración9. Posteriormente en esta especie fue ampliamente utilizada la EE10-12, también se emplea en vicuña13, llama14-16.
El voltaje empleado en la EE influye en la calidad espermática, en las alpacas la mayoría de los protocolos empleados utilizan 2 a 10 V, que eviten el estrés en los animales, para obtener eyaculados de buena calidad, según su volumen, concentración y motilidad, siempre que los machos tengan un correcto manejo previo a su aplicación10,12,17.
En otras especies se utilizan diferentes voltajes en la EE, que influyen en el tiempo para inducir la eyaculación y el volumen. En llamas se utilizan de 2 a 10 V y el eyaculado se obtiene a los 6 min14,18, también se utilizaron, con resultados similares, de 3 a 10 V19.
En esta especie, en Bolivia, la eyaculación se produjo con 18 V obteniéndose 0.9 mL de eyaculado20, en Perú, se aplicaron de 2 a 20 V, se produjo la erección del pene a los 15 V, mientras, la eyaculación necesitó 20 V, se colectó 1 mL de eyaculado21. En la vicuña se han empleado entre 2 y 12 V, la eyaculación se produjo a los 6 V13.
Es escasa la información sobre el efecto del voltaje utilizado en la EE en la calidad seminal de alpacas, debido a que se carece de una metodología confiable y reproducible para la colección de semen. El objetivo de este trabajo fue evaluar la influencia de dos voltajes en el protocolo de EE en la calidad seminal de alpacas (Vicugna pacos).
Materiales y métodos
La investigación se desarrolló entre mayo y agosto del 2020, en la provincia de Cotopaxi, cantón Latacunga, situado entre 0° 59' 10" latitud sur (LS) y los 78° 37' 13" longitud oeste (LW), a los 2739 m.s.n.m, con temperatura promedio de 12 °C, humedad relativa de 75 %, precipitaciones promedio anuales entre 500 a 1500 mm, suelo arcilloso22.
Se utilizaron las instalaciones del Centro Experimental Académico Salache (CEASA), laboratorio de Biotecnología de la Reproducción de la Carrera de Medicina Veterinaria, Universidad Técnica de Cotopaxi.
Se seleccionaron 8 alpacas machos (V. pacos), con una edad comprendida entre los 3 y 5 años, con 64±2.2 kg de peso, sin problemas reproductivos, defectos congénitos, clínicamente sanos, con alimentación a base de pastos naturales y agua ad libitum. De cada uno de estos animales se colectaron dos eyaculados con una frecuencia semanal con igual cantidad de protocolos EE para tal efecto, éstos tenían las mismas características.
Los animales fueron suministrados al proyecto de mejoramiento genético y de la lana de alpacas, de la Universidad Técnica de Cotopaxi por las comunidades indígenas de las provincias de Cañar, Chimborazo, Cotopaxi e Imbabura, de Ecuador.
La EE (Figura 1) se realizó según los principios básicos de la técnica descrita por Director et al.18, al que se le hicieron los siguientes ajustes. i) se usaron varios estímulos de 10 V, con periodos de estimulación eléctrica de 4 s, 1 s con intervalos de reposo de 1 s, durante 4-8 min ii) los estímulos fueron de 12 V, con iguales intervalos y duración. Para este procedimiento se empleó un electroeyaculador ElectroJac 5® (Ideal Instruments®, Lansing, EE. UU).
Los eyaculados se recolectaron en tubos falcón de 50 mL (Figura 2), protegidos por una funda externa que mantuvo una temperatura de 37 °C y se transportaron al laboratorio de Biotecnología de la Reproducción del CEASA en menos de 1 h desde su recogida. No se procesaron las muestras contaminadas con orina.
El volumen del eyaculado se determinó por observación directa utilizando una probeta graduada. La concentración seminal, mediante la cámara de Neubauer y la motilidad mediante un microscopio masal DM4B Y DM6B (Leica Microsystems AG, EE. UU), a 10X. Ambos parámetros se determinaron según los procedimientos descritos por Allauca et al.23.
La viabilidad espermática se determinó por tinción Eosina-Nigrosina, los espermatozoides muertos no toman colorante y aparecen rosados, en cambio, los vivos aparecen traslúcidos24.
La morfología espermática se evaluó mediante la observación de la tinción semen-eosina en un microscopio electrónico de barrido, el número de espermatozoides morfológicamente normales y anormales de acuerdo a las recomendaciones de Pérez et al.25.
Procesamiento estadístico. Se obtuvieron los estadígrafos descriptivos de cada variable. Se compararon el volumen, concentración de los eyaculados, motilidad y las patologías del semen según el protocolo de electroeyaculación mediante la prueba de t-Student para muestras independientes. En todos los procesamientos se utilizó el paquete estadístico Statgraphics Centurion26.
Resultados
En la Tabla 1 se exponen las variables seminales evaluadas de la EE con 10 y 12 V.
No existieron diferencias significativas (p > 0.05) en los parámetros seminales evaluados según el voltaje utilizado en el protocolo de eyaculación. Sin embargo, el volumen fue mayor numéricamente cuando el voltaje fue 12 V. En este grupo hubo tendencia a disminuir la mortalidad y las morfoanomalías (Tabla 2).
Tabla 1 Estadígrafos descriptivos de las variables seminales de las alpacas estudiadas
| Estadígrafos | Volumen (mL) | Concentración (x106) | Motilidad masal (%) | Mortalidad (%) | Morfo anomalías (%) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 10 V | 12 V | 10 V | 12 V | 10 V | 12 V | 12 V | 12 V | 12 V | 12 V | |
| | 0.75 | 1.10 | 2.12 | 2.25 | 81.25 | 80.00 | 17.50 | 15.00 | 12.50 | 13.75 |
| DE | 0.20 | 0.39 | 1.93 | 1.89 | 11.81 | 14.14 | 9.574 | 10.80 | 6.45 | 8.01 |
| CV | 27.75 | 35.59 | 90.87 | 84.13 | 14.54 | 17.67 | 54.71 | 72.00 | 51.63 | 58.29 |
| Mínimo | 0.50 | 0.60 | 1.00 | 1.00 | 65.0 | 60.00 | 10.00 | 5.00 | 5.00 | 6.00 |
| Máximo | 1.00 | 1.50 | 5.00 | 5.00 | 90.00 | 90.00 | 30.00 | 30.00 | 20.00 | 25.00 |
| Rango | 0.50 | 0.90 | 4.00 | 4.00 | 25.00 | 30.00 | 20.00 | 25.00 | 15.00 | 19.00 |
DE: Desviación estándar. CV: Coeficiente de variación
Tabla 2 Parámetros seminales (
| Parámetros | Grupos | ± EE | p-value | |
|---|---|---|---|---|
| 10 V | 12 V | |||
| Volumen (mL) | 0.75 | 1.10 | 0.15 | 0.16 |
| Concentración (x106) | 2.12 | 2.25 | 0.95 | 0.92 |
| Motilidad masal (%) | 81.25 | 80.00 | 6.51 | 0.89 |
| Mortalidad (%) | 17.50 | 15.00 | 5.10 | 0.74 |
| Morfoanomalias (%) | 12.50 | 13.75 | 3.63 | 0.81 |
Discussion
El volumen de los eyaculados, concentración espermática, motilidad masal de los espermatozoides, mortalidad y morfoanomalías son menores que los obtenidos en alpacas de Perú27.
El volumen fue inferior al señalado por Trujillo Bravo28, quien obtuvo 1.48 a 1.91 en machos de la Raza Huacaya de 3 a 5 años de edad. Este trabajo corrobora que las alpacas tienen bajo volumen en sus eyaculados29.
Aunque las alpacas tienen baja concentración espermática29, la obtenida en esta investigación indica, que los eyaculados tienen calidad para realizar la inseminación artificial y a partir de ellos se podrán obtener más dosis seminales, parámetro que dependerá la tasa de dilución a utilizar21.
La motilidad individual en la alpaca no es un indicador de la calidad del semen, fresco o crio preservado27, no obstante, según los criterios de Allauca at al.23, en esta investigación la motilidad masal e individual califican a los eyaculados como buenos y corroboran que los camélidos sudamericanos tienen poca, o ausencia de movilidad individual29.
Las morfoanomalías están relacionadas con el tamaño de los espermatozoides, afectan la capacidad de fertilización, pueden encontrase en cualquier segmento del espermatozoide30,31. El porcentaje de espermatozoides con formas anormales no difirió según el voltaje utilizado en la EE, lo que está motivado porque estas células presentan gran polimorfismo y varían morfológicamente interindividualmente en cada macho de los camélidos sudamericanos32,33.
La mortalidad fue inferior a la obtenida en un estudio, la colección de semen en alpacas, se hizo mediante aspiración vaginal y vagina artificial, el porcentaje se zoospermos muertos fue 24.7 y 29.2 %, respectivamente34 Cualquier protocolo de EE debe mantener la viabilidad de la mayor cantidad de espermatozoides posibles, ya que esta se relaciona positivamente con la integridad acrosomal in vivo e in vitro35.
Las causas de las diferencias de los parámetros seminales determinados en este trabajo con los consultados pueden estar motivadas por las diferencias en las condiciones edafoclimáticas, fisiológicas y de producción8.
El volumen, concentración, motilidad, las morfoanomalías espermáticas varían según el estado fisiológico del macho, edad, raza, alimentación, frecuencia de colección y separación psicosexual36.
Se concluye que el incremento del nivel de voltaje de 10 a 12 V en el protocolo de EE no tuvo influencia en sobre el eyaculado y los parámetros de calidad seminal de alpacas (V. pacos).
