Introducción

El uso de plantas y sustancias como extractos vegetales, han sido consideradas como la medicina más antigua en el mundo, refiriendo a varias investigaciones, las plantas medicinales tienen eficacia similar a los medicamentos convencionales, así el uso del bulbo del ajo (Allium sativum) utilizado desde tiempos inmemorables, que datan desde inicios de la humanidad, estudios enfocados en sus compuestos órgano sulfurados como la alicina y ajoene¹, poseen efectos beneficiosos para el sistema cardiovascular, inmunológico, como antifúngica, antimicrobiano y anticancerígeno².

El género Allium presenta más de 300 variedades, A. sativum en latín Allium, significa “oloroso” por su característico olor al ser machacado, cortado o triturado, un vegetal de 30 a 40 cm de altura, hojas ensiformes muy estrechas, tallo con flores blancas, su parte principal, el bulbo, se encuentra bajo tierra durante su crecimiento y maduración³. El ajo es una planta bulbosa compuesta de 6 a 12 bulbillos, conocidos como dientes de ajo, unidos a una base cubierta por una membrana semitransparente que forma su cabeza. Diversos estudios han reportado sus propiedades antioxidantes, antimicrobianas, anticancerígenas, antifúngica entre otras⁴, originario de Asia, los comerciantes europeos facilitaron su distribución, introduciéndose al continente americano a finales del siglo XIX por los españoles⁵.

Se cultiva en climas fríos con temperatura 13 a 24 °C, un máximo 30 °C y mínimo 7 °C, en terrenos suaves poco arenosos, que presenten buen drenaje, es un cultivo exigente, necesita prácticas de agricultura, desde la selección y preparación del suelo, la semilla, así como el riego, control de plagas, malezas entre otros. Se cosecha a los 6 a 7 meses, dependiendo las características del medio, para su cosecha se puede tomar en cuenta ciertas características como, color, textura de las hojas⁶. Existe más de 600 variedades de ajo clasificadas en dos subespecies, las de cuello blando, cuello duro, además se clasifica según su color, ajo blanco, morado, rosado, violeta, colorado, castaño, entre otras clasificaciones, ajo chino, japonés, elefante, macho⁷.

La fitoterapia señala múltiples beneficios para la salud humana, animal, gracias al uso de plantas y sus extractos, se pudo prevenir, controlar numerosas enfermedades, es así como el ajo fue sometido a diferentes estudios que refieren sus propiedades terapéuticas⁸. Diversos estudios realizados en animales han señalado el uso del ajo fresco, posee efectos antioxidantes, por su capacidad de inhibir la formación de radicales libres, reforzando el mecanismo de captación de radicales endógenos, aumentando las enzimas antioxidantes celulares entre otras características benéficas, los compuestos responsables de la propiedad antioxidante es S-alil-cisteína y alicina⁹. El ajo contiene grandes cantidades de selenio, actúa como una coenzima de eleva la actividad antioxidante en nuestro organismo. Se ha considerado a la alicina como el principal inhibidor de la agregación plaquetaria, reduce los niveles de calcio en las células musculares lisas, provocando vasodilatación, también la alicina y sus ajoenos provocan inhibición de la ciclooxigenasa y lipooxigenasa⁹. Según estudios observacionales en humanos, se menciona que el ajo induce la apoptosis de células leucémicas por estimulación en la producción de peróxido y activación del factor nuclear kappa B¹⁰.

La saprolegniosis, una enfermedad oportunista, afecta a peces de agua dulce en todas sus etapas de desarrollo, ocasiona lesiones algodonosas multifocales por la proliferación de hifas en piel, branquias¹¹, sin embargo, se pueden dar infecciones severas llegando órganos internos, como intestino, estómago¹². La Saprolegnia afecta a la mayoría de salmónidos que se encuentran bajo la crianza artificial, mejor conocida como acuacultura, en todas sus etapas de vida, las más sucesibles, las ovas, peces juveniles, también, se han visto afectados por este tipo de moho acuático, tilapias y peces de acuario¹³. Saprolegnia, un moho acuático oportunista presente en acuarios de agua dulce, de la clase Oomycetes, familia Saprolegniaceae¹⁴, del reino Chromista, filogenéticamente más cerca de las algas, sin embargo, la Saprolegnia crece en medios de cultivo para hongos, produce hifas cenocíticas y micelio por sus características morfológicas, fue clasificado anteriormente dentro del reino Fungi¹⁵. El género Saprolegnia presenta alrededor de 12 especies, Saprolegnia parasítica principal especie patógena de organismos acuáticos, actúa como patógeno secundario¹⁶, se desarrolla en material vegetal muerto, sus esporas afectan a peces, habita sus agallas, aprovechándose del estrés provocado por un manejo inadecuado, coloniza piel del hospedero causando infección fúngica, los factores que favorecen ésta, son cambios en temperatura del agua, salinidad, pH, la mayoría de las infecciones se presentan a temperaturas menores a 10 °C sin embargo la Saprolegnia puede vivir en ambientes entre 3 a 33 °C, con salinidad 1.75 % ClNa¹⁷.

Por lo general, la saprolegniosis se manifiesta de forma crónica, pudiendo complicarse por la presencia de bacterias, causando la muerte del pez en forma aguda¹⁸. Las hifas de S. parasítica invaden de forma focal la piel del pez, penetrando progresivamente las capas superficiales como epidermis, dermis incluso la hipodermis, músculo, provocando desequilibrio de fluidos orgánicos y fallo circulatorio periférico, por imposibilidad para mantener el volumen de sangre circulante¹⁹.

La trucha es originaria de América del Norte de las cuencas que drenan al pacifico, fue introducida para la pesca deportiva, iniciándose su cría en España por los años 60²⁰. Posee un cuerpo fusiforme, de finas escamas, su coloración varía de acuerdo con el ambiente, edad y estado de maduración sexual, la denominación de trucha arcoíris se debe a la presencia de una franja roja con diferentes tonalidades en sus bordes que forman un arco iris en la parte lateral del cuerpo²¹. Anatómicamente presenta dos aletas pares (un par pectoral, un par ventral o pélvica), y tres aletas impares (dorsal, anal y caudal), como todos los salmónidos poseen una aleta adiposa que no tiene una función definida²². Pueden alcanzar un peso 4.5 kg en cautiverio y 7-10 kg en aguas de lagos, ríos y mares²³. La trucha habita en espacios acuáticos no contaminados de agua dulce cristalina, con causes que presenten marcados desniveles topográficos que originen choque o golpe de agua produciendo mayor oxigenación²⁴. La temperatura óptima para su crianza oscila entre 11 a 16 °C²⁵. Es un animal carnívoro en la vida libre, se alimenta de presas vivas como: larvas de moscos, moluscos e insectos acuáticos, sus requerimientos son altos, en cautiverio se deben cumplir estrictamente con todas sus necesidades nutricionales²⁶.

La crianza de truchas, como en toda crianza animal existe la presencia de agentes etiológicos que se aprovechan, sea de una u otra manera la susceptibilidad del individuo, son capaces de causar enfermedades, alterando su desarrollo natural, es así que se podrían nombrar algunas enfermedades de tipo bacteriano, vírico, parasitario y fúngico en la crianza de este tipo de salmónidos²⁵. Entre las enfermedades bacterias se puede nombrar, furunculosis causada por Aeromona salmonicida, caracterizada por presentar ampollas en piel del salmónido, pérdida de apetito y hemorragias en el hígado. Entre otras enfermedades bacterianas tenemos yersiniosis o enfermedad de la boca roja, septicemia por Aeromona, vibriosis entre otras²⁷.

Como un ejemplo de enfermedad vírica tenemos necrosis pancreática infecciosa causada por un birnavirus, caracterizado por un cuadro séptico de mortalidad elevada en alevines²⁸. Como agentes parasitarios que afectan a las truchas tenemos, ectoparásitos como el Ichthyophthirius multifiliis, causante del punto blanco o Ich, protozoos como el Myxobolus cerebralis, la diplostomiasis, causada por una metacercaria estrigoidea conocida como Diplostomum spathaceum²⁹. La enfermedad micótica que más afecta a peces de agua dulce es la ocasionada por el género Saprolegnia, cuyo agente etiológico es un hongo oportunista que coloniza la piel y branquias del hospedero³⁰. El objetivo fue aprovechar el extracto crudo de ajo (A. sativum) como alternativa en la prevención de saprolegniosis en la trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss) del Complejo piscícola el “Porvenir” ubicado en el cantón Píllaro, provincia de Tungurahua.

Materiales y métodos

Se realizó en el complejo piscícola “El Porvenir” ubicado en la parroquia San Andrés del cantón Píllaro, Provincia Tungurahua. Latitud -1,17 longitud -78,53 altitud 3300 msnm, con una temperatura mínima promedio de 8 °C y máxima de 16 °C, Humedad Relativa 88.57 %, Coordenadas X=9870622, Y=772342(-1.1694472,-78.552773), INAMHI M0127³¹.

Los especímenes fueron adquiridos del señor Wilfrido Salas, tanto los animales enfermos como sanos fueron utilizados para el testigo negativo, se los ambiento en gavetas plásticas de 30 x 40 cm de dimensión que permitían el ingreso y salida de agua, además sirvió para separar los tratamientos y repeticiones durante todo el proyecto de investigación, su manejo diario, así como realizar los baños de inmersión, luego cada tratamiento rotulado fue colocado en un solo estanque limpio, de 1.5 x 3 m de ladrillo cubierto con cemento, estuvieron aproximadamente 25 días sin alojar trucha arcoíris (O. mykiss), previamente desinfectado, los peces seleccionados para el experimento tuvieron un peso aproximado de 120 a 200 g con una longitud de 10 a 15 cm, al momento de pasar las truchas a sus estanques se hizo a través de redes manuales, evitando lo menos posible causarles estrés y maltrato. A las 24 h de ubicados en su nuevo habitad se los marco mediante el uso de aretes, para su fácil registro e individualizar a los animales, luego se tomaron 10 días como ambientación, el agua que se les proveo fue de vertiente natural no contaminada, a temperatura con intervalo de 10-12 ºC. Una vez pasado el tiempo de ambientación, se administró la dosis del macerado fresco de ajo, por cada tratamiento que se llevó a cabo durante seis días consecutivos, las evaluaciones y registros por animal se hizo en un horario fijo de 6:30 am, antes alimentar a los peces, se registró cada animal, con malla de forma de cucharón de tipo artesanal, que permitió el acceso a las truchas, para evitar el estrés de los especímenes en estudio.

Para la obtención del macerado fresco del ajo, se machacó en un mortero ayudados de un pistilo, e inmediatamente se lo filtro para evitar que los componentes externos de la cáscara se queden en la preparación, una vez obtenido la dosis pertinente a cada tratamiento se lo mezclo con 20 L de agua contenidos en tinas, para luego sumergir a las truchas en el baño de inmersión ayudados de una pala de madera, que distribuirá homogéneamente la preparación cubriendo toda la superficie de los animales, durante 20 min por cada tratamiento, éste procedimiento se lo hizo diariamente, con las dosis T₁ 250, T₂ 500 y T₃ 750 mg/L, con dos testigos, que no llevaron inclusión del macerado fresco de ajo, el efecto de la inclusión sobre la saprogneliasis fue analizada a las 24, 48, 72, 96, y 120 h.

Cálculo de dosis del macerado fresco de ajo

Factores de estudio. Aplicación del macerado fresco de ajo en los siguientes tiempos: 24, 48, 72, 96 y 120 h, en las dosis: T₀ negativo 0 mg/L de macerado fresco, T₀ positivo 0 mg/L, T₁ 250 mg/L, T₂ 500 mg/L, T₃ 750 mg/L.

Caracterizar los sintomatología clínica y lesiones de Saprogneliasis en trucha arco iris (O. mykiss) juveniles, durante el tiempo de exposición al macerado fresco de ajo por tratamiento. Se trabajó con peces juveniles distribuidos en 10 por estanque 1 m² los cuales estaban construidos de ladrillo con enlucidos de cemento protegidos con una cubierta de zinc, con entradas de agua controlada y flujo constante, un total de 15 estanques, con un total de 150 especímenes (10 a 15 cm de longitud con peso promedio de 150 a 200 g), un testigo positivo con saprogneliasis diagnosticada, un testigo negativo conformada por animales completamente sanos, y los últimos tres estanques, con dosis del macerado fresco de ajo durante seis días.

Variables respuesta. La sintomatología clínica se determinó de todos los peces, se monitoreo cada día, desde que estuvieron expuestos al macerado fresco de ajo, se caracterizó de manera independiente cada sintomatología, se observó y registro en fichas individuales, se analizó todo tipo de signos desde problemas letárgicos. Las lesiones se las estableció de todos los peces, cada lesión externa, se examinó hemorragias en base de aletas, estructuras algodonosas en aletas y branquias, así como manchas en el cuerpo de los animales, se tomaron a los peces mediante redes manuales y se registró su mejoría o no frente a la exposición al macerado de ajo crudo, estas dos variables se registró, % de mortalidad, el último día del experimento se realizó necropsia de cada uno de los especímenes, para observar posibles lesiones internas como hemorragias.

Se analizó a través de una estadística descriptiva de frecuencia, se valoró el tiempo que necesito el macerado fresco de ajo (A. sativum), además, se evaluó la concentración efectiva, y finalmente, el análisis de Saprogneliasis por Saprolegnia spp., se detalló la patológica por cada estanque de todos los animales, se trabajó con dos testigos uno positivo y uno negativo para la validación de la investigación.

Resultados

Discusión

La investigación realizada por Ñahuincopa Vergara³², utilizó Probit DL₅₀ como resultado, la concentración del extracto de ajo al 70.36 % a 24 h y 68.34 % a 48 h de efecto inhibidor, en base a sus resultados menciona que Saprolegnia sp., es sensible al tratamiento³². Por otro lado, Armuelles Bernal et al.³³, evaluaron el efecto de la adición del polvo de ajo 2 y 4 % en la dieta del pez Jurel (Seriola lalandi) como tratamiento preventivo contra infestaciones de Zeuxapta seriolae, un total de 180 organismos distribuidos en tres grupos experimentales un control y 2 tratamientos con 3 repeticiones por cada uno, la dieta suplementada con polvo de ajo se les administro durante 32 días, luego se procedió a infestar el cultivo del pez jurel con el parasito Z. seriolae. De igual manera, Prieto et al.³⁴, manifiesta que el efecto antibacteriano del A. sativum es parecido a la penicilina actuando específicamente contra bacterias Gram-negativas convirtiéndose en un antibiótico de acción eficaz al utilizar en dosis de 50 mg/día durante un tratamiento de 3 días consecutivos. Villamar Ochoa³⁵, señala que el uso de ajo y limón como sustitución de antibióticos y desinfectantes en la producción camarones, dio buenos resultados en el tratamiento de enfermedades, señala que gracias a la acción de estos dos productos naturales se logra reducir notablemente la presencia de microorganismos patógenos, se estimula las defensas de los camarones reduciendo la aparición de enfermedades y por ende la mortalidad de los crustáceos.

Barriga González & Clavijo Rojas³⁶ al evaluar el verde malaquita y azul de metileno versus el extracto de ajo y tabaco sobre el control y erradicación en el pez ornamental tigrito obtuvieron resultados con el verde malaquita y azul de metileno como tratamiento químico a dosis de 7 gotas/40 L de agua eliminando el protozoario a los 5 días. El estudio realizado por Juárez-Segovia et al.³⁷ han reportado que el extracto de ajo obtenido mediante maceración en una solución salina amortiguada por fosfatos posee efecto anti-fúngico sobre hongos del género Aspergillus inhibiendo su crecimiento. Silva Blanco³⁸, afirma que el ajo elimina el 100 % del ectoparásito Trichodina ssp., aplicado en forma de baño con una concentración de 800 ppm a tilapias en un tiempo de dos días, en cuanto a ganancia de peso y conversión alimenticia, no se observaron diferencias significativas entre tratamientos sin embargo manifiesta que la ración con inclusión del extracto de ajo es bien tolerada por los peces y además actúa fortaleciendo el sistema inmunológico protegiéndoles de los distintos patógenos, aumentando su supervivencia. Agurto Rodríguez & Rivera Intriago³⁹ en su estudio realizado en camarones evaluaron las propiedades antibacterianas, antioxidantes e inmuno estimulantes de los extractos de ajo, orégano, té verde arándano, Astragalus y propóleo, el efecto antibacteriano se evaluó al utilizar 5 bacterias patógenas, 2 de importancia en acuicultura, 2 bacterias entéricas que afectan a los consumidores de animales acuáticos contaminados y 1 bacteria oportunista en humanos. García Gómez & Sánchez-Muniz⁴⁰, realizaron ensayos a base de extractos vegetales utilizados como antibacterianos en peces, el ajo en solución salina inhibió el crecimiento de Aeromonas hydrophila a una concentración de 6.25 mg/mL^-1 y Photobacterium damselae a una concentración de 6.3 mg/mL^-1. Se observó que el grupo de truchas del testigo positivo previamente enfermas con Saprolegnia sp., aumentaba las lesiones macroscópicas con el pasar del tiempo y algunas de las truchas morían, por otro lado el testigo negativo que al inicio del experimento los especímenes no presentaban lesiones asociadas al hongo, mostraron lesiones al 4 día de la observación, por el contrario las truchas sometidas al tratamiento a base del macerado fresco de ajo mejoraban su aspecto y a partir del 2 día de aplicación se notó disminución de las lesiones causadas por el hongo, es por ello que se concluye que el macerado fresco de ajo actúa como un anti fúngico natural y controla la saprolegniosis en truchas arcoíris.

Las lesiones macroscópicas que se identificó en las truchas arcoíris empleadas en el experimento fueron las siguientes: (perdida de escamas, despigmentación de la piel, erosión, congestión, pigmentación blanca amarillenta, presencia de estructuras fúngicas con apariencia de motas de algodón, úlceras y necrosis). Otra sintomatología que se identifico fue: (letargo, desequilibrio, agotamiento y perdidas de reflejo provocando inclusive la muerte de las truchas).