Introducción
Las alpacas se distribuyen naturalmente en altitudes entre 3600-5400 m.s.n.m. en América del Sur, más de un millón de pequeños productores tienen alpacas y llamas como principal medio de subsistencia, estos animales proveen carne, leche, fibra, energía de transporte, abono, además son un elemento importante de su identidad cultural de los pueblos altoandinos1,2.
El parasitismo viene a constituirse una amenaza común en la salud y productividad de las alpacas3, repercutiendo directamente en el ingreso económico de productores alpaqueros, por algunos protozoarios del género Eimeria, afectan la salud de neonatos, alpacas juveniles desde las 2-3 semanas de vida, ocasionándoles a estas últimas hasta un 80 % de diarreas4, muerte 43.3 % de crías entre 1 a 2 meses de vida5. Entre las especies figuran eimerias pequeñas como Eimeria punoensis, E. alpacae y E. lamae6, también fueron descritas eimerias grandes como E. macusaniensis, E. ivitaensis, especialmente la primera sola o asociada con E. lamae o E. ivitaensis se consideran altamente patógenas, hallándose E. macusaniensis en procesos diarreicos que ocasionan graves lesiones intestinales en alpacas7.
Para evitar las consecuencias de eimeriosis, es importante la prevención, a través de manejo e higiene, acompañados del uso profiláctico de fármacos como sulfonamidas, ionóforos, amprolium, halofuginona, toltrazuril, nicarbazina8. Dubey et al.9, menciona que la eficacia de varios fármacos para tratar la coccidiosis clínica es desconocida y, que ningún anticoccidial tiene efecto medible sobre las etapas tardías de gamontes y ooquistes que se han relacionado comúnmente con la coccidiosis clínica asociada con E. macusaniensis y E. ivitaensis. Sin embargo, se estudió el uso de fármacos preventivos en alpacas como decoquinato a 0.5 mg/kg PV durante 28 días y amprolium a 5 mg/kg PV por 21 días en alpacas10, también se utilizó toltrazuril a dosis bajas, por ser un fármaco que actúa sobre todos los estadios intracelulares del parasito11. De modo similar Ballweber10 realizó tratamientos con 15 a 20 mg/kg PV de toltrazuril en alpacas, la respuesta al uso de toltrazuril para otras especies animales es eficiente, siendo así, en cabras induce la eliminación completa de ooquistes de eimerias 7 días post tratamiento con una dosis única de 20 mg/kg PV11, en terneros también se reporta respuesta anticoccidial con 15 mg/kg PV12 y 20 mg/kg PV de toltrazuril13, lo mismo ocurre con ovinos a 20 mg/kg PV14. Debido a que toltrazuril actúa contra todas las etapas de desarrollo intracelular de los coccidios, interfiriendo en la división del núcleo, la actividad de las mitocondrias y cuerpos formadores de paredes en los microgametos, lo que resulta en la muerte del organismo15,16 catalogado como un fármaco prometedor sobre el control de eimerias en diferentes especies animales.
Considerando los antecedentes descritos el presente estudio se diseñó con el objetivo de determinar la eficacia del toltrazuril como profiláctico sobre el control de eimerias, para determinar la dosis profiláctica frente a especies de eimerias en crías de alpacas situadas en puna húmeda, debido a que aún no se reportan datos referentes de dosis efectivas de toltrazuril para el control de eimerias, y cuyos resultados serán útiles en la prevención de coccidiosis.
Materiales y métodos
Lugar de estudio. El estudio fue desarrollado durante el mes de mayo del año 2017, en el Centro de Investigación de Camélidos Sudamericanos (CICAS) La Raya de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco (UNSAAC) ubicado a una altitud de 4130 msnm, distrito de Maranganí, provincia de Canchis y Región Cusco-Perú.
Animales. Para el presente estudio se utilizaron 50 crías de alpaca de raza Huacaya de 3 a 4 meses de edad, con peso vivo (PV) promedio de 10 kg, los animales se hallaban en aparente buen estado clínico, todos los animales pertenecen al CICAS “La Raya”.
Las 50 crías fueron distribuidas en 5 grupos (4 tratamientos y 1 control) de 10 animales cada uno en forma aleatoria, basándonos en las dosis del toltrazuril (mg/kg PV) administradas por vía oral (VO) (Figura 1). Al grupo 1 G1 se le administro 15 mg/kg PV, al grupo 2 G2 18 mg/kg PV, al grupo 3 G3 22.5 mg/kg PV, al grupo 4 G4 30 mg/kg PV y al grupo 5 G5 grupo control sin aplicación de placebo alguno, pero sometido a la misma manipulación para la colección de muestras. Posterior a la aplicación del fármaco todos los animales permanecieron bajo las mismas condiciones de manejo y alimentación consumiendo pasturas nativas del CICAS La Raya. La dosis de 15 mg recomendada por el fabricante del fármaco (Tolcocx®) y las dosis mayores por experiencias realizadas por otros autores17 y por experimentos previos.
El fármaco. Tolcocx®, Laboratorios Biomont Perú, con base química de toltrazuril a 50 mg/mL, fecha de producción 07-2015, lote 074095, asumimos esta dosis debido a que no se dispone de datos sobre su uso en el tratamiento de la coccidiosis en camélidos10.
Recolección de muestras. Las colección de muestras fecales fue directa de la ampolla rectal entre las 6 y 7 h, previo al arreo, de manera consecutiva a la administración del fármaco (Figura 2), en bolsas de polietileno rotuladas sin el uso de conservantes, su traslado fue inmediato para su posterior análisis el mismo día de la colección, la obtención de muestras fue previo al tratamiento (día 0), para conocer la carga inicial de eimerias y se corroboró el efecto de las dosis de toltrazuril, transcurridos 7 días del tratamiento.
Análisis de muestras. Se realizó el análisis coproparasitológico en el laboratorio de Parasitología de la Escuela de Medicina Veterinaria Sede Canchis de la UNSAAC. Para determinar la cantidad de eimerias se realizó el recuento de ooquistes por gramo de heces (OPG), mediante la técnica de MacMaster modificado utilizando solución de Sheather y aplicando el factor de corrección de 10018,19.
Análisis estadístico. Para describir los datos cuantitativos de OPG de eimerias se utilizaron promedio y el error estándar de la media. Mientras que para determinar el efecto de las dosis de toltrazuril en el control de eimerias pequeñas (E. punoensis, E. alpacae, E. lamae) y eimeria grande (E. macusaniensis), los datos fueron sometidos a un análisis de varianza. Para discriminar la diferencia de medias entre grupos de tratamiento, se realizó la diferencia mínima significativa de Fisher (LSD). Para el análisis estadístico se utilizó el paquete estadístico Statgraphics Centurion versión 1820.
Resultados
La efectividad de dosis de toltrazuril sobre el recuento de ooquistes de eimerias pequeñas y grande en crías de alpacas se ilustra en la Tabla 1, se observa que la cantidad de ooquistes tanto en eimerias pequeñas y grande antes del tratamiento (día 0) fue similar (p>0.05). A los 7 días del tratamiento, las eimerias pequeñas (E. punoensis, E. alpacae, E. lamae) con dosis de 15 mg/Kg/PV mantiene una población similar al grupo control (p>0.05), mientras que al aplicar 18.7 y 22.5 mg/Kg/PV la cantidad de ooquistes disminuyen, siendo el valor de 0 OPG con la dosis de 30 mg/Kg/PV (p≤0.05). En cuanto a la eimeria grande (E. macusaniensis) a los 7 días se evidencia que hubo una reducción significativa de OPG con las dosis entre 22.5 mg/kg PV y 30 mg/kg PV (P≤0.05).
Grupos | n | Dosis de toltrazuril mg/kg PV | OPG Eimerias pequeñas | OPG Eimeria grande | ||
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Pre tratamiento | Post tratamiento | Pre tratamiento | Post tratamiento | |||
Día 0 | Día 7 | Día 0 | Día 7 | |||
G1 | 10 | 15.0 | 5520±1721 | 4680c ± 1767 | 3620±1633 | 3080b ± 1559 |
G2 | 10 | 18.7 | 5280±2231 | 3050b ± 2274 | 3950±2444 | 2810b ± 2376 |
G3 | 10 | 22.5 | 8570±3401 | 1200ab ± 875 | 5710±3071 | 1200a ± 875 |
G4 | 10 | 30.0 | 7720±3267 | 0a ± 0 | 2130 ±1310 | 0a ± 0 |
G5 | 10 | Control | 4970±2345 | 5110c ± 1325 | 3390±2386 | 2710b ± 1105 |
Especies | Antes de tratamiento (OPG) | Después del tratamiento (OPG) | ||||
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Promedio | Dosis toltrazuril (mg/kg PV) | Control | ||||
15 | 18.7 | 22.5 | 30 | |||
Eimerias pequeñas | ||||||
E. punoensis | 1936 | 460 | 240 | 0 | 0 | 1330 |
E. alpacae | 60 | 460 | 0 | 0 | 0 | 0 |
E. lamae | 652 | 755.56 | 0 | 0 | 0 | 800 |
Eimeria grande | ||||||
E. macusaniensis | 3760 | 3080 | 2810 | 1200 | 0 | 2800 |
Sumatoria | 6408 | 4755.56 | 3050 | 1200 | 0 | 4930 |
La presencia de especies de eimerias, en OPG, en crías de alpacas antes y después del tratamiento según dosis de toltrazuril se presentan en la Tabla 2, se evidencia que del total de crías de alpacas examinadas previas al tratamiento resultaron parasitadas el 94 % (47/50), con un promedio de 6408 OPG de Eimerias spp., con predominancia de E. macusaniensis frente al resto (P≤0.05) y no se evidencia la presencia de ooquistes de E. ivitaensis
La eficacia del toltrazuril sobre las especies de eimerias, en la Tabla 2 se observa que al administrar por vía oral 15 mg/kg PV de toltrazuril los ooquistes de E. punoensis, están en menor cantidad, respecto al grupo control, pero las especies de E. alpacae, E. lamae y E. macusaniensis no se ven afectadas, considerándose una dosis insuficiente para su control. Al aplicar 18.7 mg la cantidad de ooquistes se reduce en todas las especies, pero aún se mantiene la alta cantidad de 2810 ooquistes de E. macusaniensis. El efecto de 22.5 mg/kg PV reduce a cero la presencia de ooquistes de eimerias pequeñas, sin embargo E. macusaniensis se encuentra presente con 1200 OPG, cantidad que se reduce a cero al proporcionarles 30 mg/kg PV, lo cual es similar en el resto de especies.
Discusión
La eficiencia de la dosis del toltrazuril frente a eimerias en crías de alpacas, se observa en la Tabla 1, 15 mg/ kg PV, no presento reducción de la cantidad de ooquistes, referente a lo observado en el grupo control, a pesar que Ballwever10 reporta esta cantidad como dosis preventiva para vacunos, así como el fabricante lo sugiere para bovinos (Tolcocx®, Laboratorios Biomont Perú), la diferencia de su efecto en alpacas por ser otra especie, por los diferentes mecanismos fisiológicos que se suscitan en cada especie animal21.
Relacionado su efecto sobre eimerias pequeñas, dosis de 18.7 y 22.2 mg/kg PV producen una reducción de ooquistes, comparando al grupo control, similar a 20 mg/kg, recomendada para cerdos Ballweber10, bovinos Sánchez et al.13 y cabras Iqbal et al.11. Mientras, para controlar eimerias grandes E. macusaniensis, 18.7 mg/kg PV fue insuficiente, posiblemente por la resistencia de su pared gruesa22 frente de a diversos agentes químicos17. Pero con 22.2 y 30 mg/kg PV se logra controlar eimerias grandes, que es considerada la más patógena para crías de alpacas23.
Con referencia al efecto del fármaco entre especies de eimerias, el 94 % (47/50) de crías de alpaca tienen presencia de alguna especie de eimeria, porcentaje mayor al reportado por Salazar Robayo24, Camareno et al.25 y Kultscher et al.26 quienes mencionan valores de 70.7, 52.4 y 75.1 %, respectivamente, que probablemente se deba a que estos autores trabajaron con animales de mayor edad.
Antes del tratamiento, el promedio de las cuatro especies de eimerias halladas en crías de alpacas fue 6408 OPG, cifra superior a lo reportado por Quina Quina27 quien informo 3883 OPG de eimerias en alpacas de 3 meses de edad, diferencia que atribuimos a que incluyeron en su trabajo animales adultos, la presencia de eimerias es menor a los hallazgos en crías28.
Las eimerias preponderantes son E. macusaniensis y E. punoensis que se hallan en el 78 % (30/50) y 58 % (29/50) en las crías antes del tratamiento, similar a Diaz2 informo que E. macusaniensis es superior al resto de especies, en 38 % de crías de tres meses, en cambio Salazar Robayo & Galecio24 mencionan 29.3 % en alpacas de 5 meses y adultas como portadoras, respecto a la cantidad Quina Quina27 hallo un pico máximo de 1304 OPG de E. macusaniensis. Por su parte Camareno et al.25, reportaron en alpacas de 5 a 12 meses la prevalencia de E. macusaniensis con relación al resto de especies (P≤0.05) y entre especies pequeñas el 66.2 % E. punoensis, del mismo modo Díaz et al.2 hallaron 78 % de crías infectadas con E. punoensis.
Es importante distinguir las especies de parásitos porque pueden estar infectando simultáneamente un hospedero y varían en patogenicidad y su biología29, es así que tomamos como referente de patogenicidad a E. macusaniensis causante de lesiones moderadas a graves en el intestino de crías de alpacas muertas con signos de diarrea23. Los hallazgos nos indican que dosis inferiores a 22 mg/kg PV fueron necesarias para reducir la eliminación de ooquistes de eimerias pequeñas, pero insuficiente para controlar E. macusaniensis (Tabla 2), podría deberse al mayor tamaño y la estructura del parasito22 que no permite el efecto suscitado en las especies pequeñas17, este hallazgo señalaría que dosis superiores de toltrazuril, a las recomendadas por Ballweber10 (15-20 mg/kg/PV), son efectivas para el control de eimerias. E. macusaniensis contrariamente a los OPG provenientes de E. alpacae, E. lamae y E. macusaniensis no se ven afectados. Hasta la fecha aún no se reportaron estudios referentes a dosis profilácticas de toltrazuril en alpacas, ni su efecto en las diferentes especies de eimerias.
El presente trabajo informa que al aplicar 22.5 y 30 mg/ Kg PV de toltrazuril en dosis únicas, actúa como profiláctico, logrando controlar la eliminación de ooquistes de E. punoensis, E. alpacae, E. lamae y E. macusaniensis, y podría ser utilizado para reducir la diseminación de las eimerias y la presentación de eimeriosis en crías de alpacas.