Abstract

BONIFAZ PEREZ, Diego; SOSA TORDOYA, Luis Fernando  and  CHOQUEHUANCA QUISPE, José Luis. Diagnóstico  de leishmaniasis cutánea por Reacción en Cadena de la Polimerasa, a partir de material genético obtenido de frotis de lesión teñidos con Giemsa. BIOFARBO [online]. 2011, vol.19, n.2, pp. 28-38. ISSN 1813-5363.

En Leishmaniasis, la patogenicidad, abordaje terapéutico y los posibles métodos de control son determinados en gran parte, por la especie de Leishmania infectante identificada. En el presente estudio se evaluaron tres procedimientos de extracción de ADN de Leishmania a partir de frotis de lesión teñidos con Giemsa. A partir de frotis que contenían suspensiones con concentración conocida de promastigotes de Leishmania braziliensis teñidos con  Giemsa y frotis de lesión de pacientes con leishmaniasis cutánea, se evaluó la sensibilidad analítica y diagnóstica de los métodos basados en: Solución de lisis con Proteinasa K (SLPK), Boiling y Kit Comercial Promega Wizard Genomic. Los datos obtenidos de la PCR fueron comparados frente a los resultados de una PCR convencional y examen parasitológico directo. De los tres protocolos evaluados, el método de SLPK presentó el mejor rendimiento con concentraciones de ADN en el rango de 19,77 a 38,18 ng/µL e índices de pureza  entre 1,037 a 1,046; éste método presenta una sensibilidad diagnóstica de 93%, especificidad de 45%, valor predictivo positivo de 68% y valor predictivo negativo de 84%. El grado de correlación según el índice de Kappa del método SLPK frente al frotis fue Moderada de 0,403 (p< 0,005) y entre los dos métodos de PCR fue Buena de 0,700 (p< 0,005). Los resultados de muestran que obtener ADN a partir de frotis teñidos con Giemsa  por el método SLPK es una buena alternativa al diagnóstico molecular de leishmaniasis y que además sería una herramienta útil para determinar polimorfismos genéticos del parásito.

Keywords : Leishmania; frotis teñido con Giemsa; PCR; test diagnóstico.