Revista CON-CIENCIA

Fluorometric method for the identification of cytotoxic natural agents and its application in the evaluation of selective antiparasitic agents

Resumen El ministerio de salud tiene como una de las prioridades en investigación a las enfermedades infecciosas, entre las que incluye a las leishmaniasis y la tripanosomiasis americana. En la Facultad Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas se estudian especies vegetales medicinales utilizadas por la cultura Tacana como fuente de agentes antiparasitarios potenciales. Los laboratorios dedicados al descubrimiento de moléculas naturales con actividad antiparasitaria, tienen el desafío de desarrollar protocolos que permitan detectar biomoléculas selectivas, efectivas y menos tóxicas que las disponibles. Por ende, las evaluaciones antiparasitarias in vitro (CI50), deberían ir acompañadas de evaluaciones de citotoxicidad (DL50), con el fin de calcular un Índice de Selectividad (IS=DL50 / Cl50 como parámetro de especificidad biológica. La citotoxicidad fue medida sobre líneas de macrófagos (RAW 264.7, murino), células involucradas en las infecciones por parásitos intracelulares. El protocolo fluorométrico parte con una población de 5x10(4) células/ mL, incubada a 37°C en DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's médium), por 96 horas, con adición de resazurina (2mM) 3 horas antes de las lecturas finales. Bajo estas condiciones se evaluó la citotoxicidad de drogas control y 15 extractos vegetales seleccionados por su actividad anti-kinetoplastida. El extracto de Cosmailu fue el más citotóxi-co, Ejije bid'u resultó selectivo para T. cruzi y Leishmania amazonensis, mientras que Id'ene eidhue, fue selectivo para L. amazonensis. Finalmente, los otros 12 extractos resultaron ser poco selectivos o citotóxicos.

Abstract The Ministry of Health has infectious diseases as one of the research priorities, including leishmaniasis and American try-panosomiasis. The Faculty of Pharmaceuti-cal and Biochemical Sciences develops eval-uations of medicinal plant species used by the Tacana culture as a source of potential antiparasitic agents. Laboratories dedicated to the discovery of natural molecules with antiparasitic ac-tivity, have the challenge of developing pro-tocols that allow the detection of selective, effective and less toxic biomolecules than those available. Therefore, in vitro antipar-asitic evaluations (IC50) should be accompa-nied by cytotoxicity evaluations (LD50), in order to calculate a Selectivity Index (IS = LD50 / IC50) as a parameter of biological specificity. The cytotoxicity was measured on mac-rophage line (RAW 264.7, murine), cells en-gaged on intracellular parasites infections. The fluorometric protocol starts with an ini-tial population of 5x10(4)cells/mL, incubated at 37°C, in DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's medium) for 96 hours with addition of resazurin (2mM) 3 hours, before final read-ings. Under these conditions the cytotoxicity of control drugs and 15 plant extracts, se-lected by their anti-kinetoplastid activity, was evaluated. Cosumailu extract was the most cytotoxic, Ejije bid'u was selective for T. cruzi, and Leishmania amazonensis, while Id'ene eidhue, was selective for L. amazonensis. Finally, the other 12 extracts were lit-tle selective or cytotoxic.

Evaluation of compliance with pharmacotherapy in chronic outpatients attended in two health care centers in a rural area of Paraguay

Resumen La falta de cumplimiento con la terapia farmacológica es un hecho recurrente y un problema global que impide que la morbi-mortalidad asociada a enfermedades crónicas pueda ser evitada. Describir el cumplimiento de la farmacoterapia en pacientes crónicos, que asisten a dos centros asistenciales de salud de la ciudad de Horqueta, una zona rural al norte de Paraguay. Es un estudio estudio observacional, descriptivo, prospectivo y transversal de pacientes con Diabetes Mellitus tipo 2, Hipertensión y Dislipidémicos, con muestreo no probabilístico por conveniencia, utilizando el Test de Morisky-Green para determinar el cumplimiento al tratamiento farmacológico. Los principales resultados obtenidos fueron 63,2% mujeres; 70,6% con estudio primario concluido; 72,1 % con pareja estable, el 63,2% amas de casa y el 55,9% residentes en las áreas rurales, cercanas a ambos centros asistenciales. Los problemas de salud predominantes fueron, diabetes con hipertensión 38,2% y la hipertensión, 30,9 %. La media del tiempo de evolución de la enfermedad para los pacientes con diabetes e hipertensión fue de 10,4 años, y para los pacientes con hipertensión de 11,5 años. El 55,9%, demostró incumplimiento con la terapia. Los pacientes mas cumplidores son los que tienen más de 20 años de tratamiento para su enfermedad, representado por el 81,8 %. El 55,9% no cumplen con la terapia. En el 71,1% de.los casos la causa principal del no cumplimiento de la farmacoterapia fue el olvido.

Abstract The lack of compliance with drug therapy is a recurring fact and a global problem that prevents the morbidity and mortality associated with chronic diseases can be avoided. Describe the fulfillment of pharmacotherapy in chronic patients, who attend two health care centers in the city of Horqueta, a rural area in northern Paraguay. It is an observational, descriptive, prospective and cross-sectional study of patients with type 2 Diabetes Mellitus, Hypertension and Dyslipidemic, with non-probabilistic sampling for convenience, using the Morisky-Green Test to determine compliance with pharmacological treatment. The main results obtained were 63.2% women; 70.6% with primary study completed; 72.1% with a stable partner, 63.2% housewives and 55.9% residents in rural areas, close to both care centers. The predominant health problems were, diabetes with hypertension 38.2% and hypertension, 30.9%. The mean time to disease progression for patients with diabetes and hypertension was 10.4 years, and for patients with hypertension of 11.5 years. 55.9% showed non-compliance with the therapy. The most compliant patients are those who have more than 20 years of treatment for their disease, represented by 81.8%. 55.9% do not comply with the therapy. In 71.1% of cases, the main cause of non-compliance with pharmacotherapy was forgetfulness.

Study of molecular properties of glyphosate using chemical-quantum computational methods

Resumen En este trabajo de investigación se realizó un estudio computacional del glifosato calculando detalladamente las propiedades moleculares del mismo. Se logró a través de este trabajo la caracterización del herbicida glifosato, presentado valores de longitudes de enlace y ángulos así como de propiedades químicas de interés en estudios QSAR, de energías y de bioactividad obtenidos por métodos mecano cuánticos utilizando la mecánica molecular, semiempirico y ab ini-tio. Se analizaron los resultados obtenidos al comparar los datos experimentales del glifosato con los obtenidos computacional-mente demostrando una buena correlación. La estructura del glifosato fue trazada usando la interfaz de Hyperchem; esta fue sometida a cálculos de optimización geométrica inicialmente de Mecánica Molecular para obtener la estructura más estable, posteriormente todas las estructuras fueron analizadas mediante el método semiempirico PM3 para obtener valores más confiables de energía y geometría. Para el método ab initio se usó la base 3-21G. La minimización de la energía de las estructuras se desarrolló por el método Fletcher-Reeves de gradiente conjugado hasta un valor de gradiente RMS (root-mean-square) menor a 0,100 Kcal/(A°mol) o un máximo de 500 ciclos de iteración, el límite de convergencia SCF empleado fue de 0,001 Kcal/mol. Las propiedades moleculares necesarias en QSAR (Relaciones estructura actividad) y la predicción de bioactividad se realizó en el software quimio informático Molinspiration. El ordenamiento de los datos numéricos, las gráficas, regresiones y el ANOVA se realizaron en Excel 2015. Los valores encontrados de longitud de enlace resultan muy satisfactorios, se encontró que el estadístico F (0,1574) es menor al valor crítico (2,479) y la P es mayor a 0,05, aceptándose la hipótesis nula, la desviación media absoluta resultó 0,27Å. La regresión dió coeficientes r² de 0,89-0,86 y 0,76 para el método semiempirico, mecánica molecular y ab initio respectivamente.Para los ángulos, los valores encontrados también son satisfactorios, el estadístico F ( 0,226 ) valor crítico (2,43) y la P es mayor a 0,05, desviación media absoluta encontrada fue de 5,02 grados

Abstract In this research work a computational study of glyphosate was carried out, calcu-lating in detail the molecular properties of it. Through this work, the characterization of the glyphosate herbicide was achieved, presenting values of link lengths and angles as well as chemical properties of interest in QSAR studies, of energies and bioactivi-ty obtained by quantum mechano methods using molecular, semi-empirical and ab-me-chanical mechanics. initio The results obtained were analyzed by comparing the experimental data of glyphosate with those obtained computationally demonstrating a good correlation. The structure of glyphosate was plotted using the Hyperchem inter-face; This was subjected to geometric opti-mization calculations initially of Molecular Mechanics to obtain the most stable structure, subsequently all structures were ana-lyzed using the PM3 semi-empirical method to obtain more reliable energy and geom-etry values. For the ab initio method, the 3-21G base was used.The energy minimiza-tion of the structures was developed by the Fletcher-Reeves method of conjugate gradi-ent up to a RMS (root-mean-square) gradi-ent value less than 0,100 Kcal / (A°mol) or a maximum of 500 iteration cycles , the SCF convergence limitused was0,001 Kcal /mol. The molecular properties required in QSAR (Activity structure relationships) and bioac-tivity prediction were performed in the Molinspiration computer chemo software. The ordering of the numerical data, the graphs, regressions and the ANOVA were performed in Excel 2015. The values found for link length are very satisfactory, it was found that the F statistic (0,1574) is less than the critical value (2,479) and the P is greater than 0.05, accepting the null hypothesis, the ab-solute mean deviation was 0.27Å. The re-gression gave r² coefficients of 0,89-0,86 and 0,76 for the semi-empirical method, molecular mechanics and ab initio respectively. For the angles, the values found are also satisfactory, the statistical F (0,226) critical value (2,43) and P is greater than 0,05, absolute mean deviation found was 5,02 degrees

**Protein modeling of G. Lamblia Tubulin through sequence homology**

Resumen La Giardiasis ocasionada por Giardia in-testinalis (conocida como Giardia lamblia), es una de las infecciones parasíticas más comunes en todo el mundo y con mayor pre-valencia en países en desarrollo como el nuestro. Existen muchas drogas para el tratamiento de la giardiasis, de diferente eficacia y efectos adversos como la curcumina que inhibe la polimerización de los micro-tubulos por un mecanismo distinto al de la colchicina. Sin embargo, la estructura cristalográfica de la Tubulina de G. lamblia (cadenas a y P) permanece desconocida. El análisis de alineamiento de secuencias (PBLAST) indica una identidad del 86,98 y 88,32 % entre las cadenas a y p de la Tubulina de G. lamblia y B. taurus (PDB:5NQT). El Modelamiento por Homología de la estructura proteica de la Tubulina de G. lamblia utilizando como molde a la Tubulina de B. tau-rus mediante el servidor SWISS-MODEL, generó una estructura proteica con los siguientes parámetros: z-core = -1,16 y -1,41, QMEANscore6 = 0,71 y 0,70, % de confiabi-lidad (de los diagramas de Ramachandran) = 96,08 y 96,95 %, RMS (Root Mean Square) = 0,081 y MOLPROBITYscore = 1,26. Estos parámetros indican que la estructura proteica de la Tubulina de G. lamblia obtenida a partir del Modelamiento por Homología es de buena calidad, por tanto, esta estructura podría ser utilizada en futuras evaluaciones, como el análisis in silico de compuestos antiGiardia.

Abstract Giardiasis caused by Giardia intestina-lis (known as Giardia lamblia), is one of the most common parasitic infections in the world and with a higher prevalence in de-veloping countries like ours. There are many drugs for the treatment of giardiasis, of dif-ferent efficacy and adverse effects such as curcumin that inhibits the polymerization of microtubules by a mechanism other than colchicine. However, the crystallograph-ic structure of G. lamblia Tubulin (a and p chains) remains unknown. The sequence alignment analysis (PBLAST) indicates an identity of 86,98 and 88,32 % between the a and p chains of the Tubulin of G. lamblia and B. taurus (PDB: 5NQT). Homologous Modeling of the protein structure of G. lamblia Tubulin using the B. taurus Tubulin as a template employing the SWISS-MODEL server, generated a protein structure with the fol-lowing parameters: z-core = -1,16 and -1,41, QMEANscore6 = 0,71 and 0,70, % of reli-ability (from Ramachandran plots) = 96,08 y 96,95 %, RMS (Root Mean Square) = 0,081 and MOLPROBITYscore = 1,26. These parameters indicate that the protein structure of G. lamblia Tubulin obtained from Homol-ogy Modeling is of good quality, therefore, this structure could be used in further eval-uations, such as the in silico analysis of anti-Giardia compounds.

Validation of the method for the quantification of cyclosporine a in whole blood by HPLC / DAD

Resumen El presente estudio describe la validación del método para la cuantificación de Ciclosporina A en sangre total por Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) en Fase Reversa con Detector de Arreglo de Diodos. La ciclosporina A es un fármaco inmunosupresor con un estrecho margen terapéutico además de su amplia variabilidad en los procesos farmacocinéticos, justifican su monitorización de dosis a pacientes con trasplantes de órganos para evitar los efectos secundarios y el posible rechazo del órgano trasplantado. La separación de la Ciclosporina A de una matriz compleja como la sangre fue llevada a cabo de manera exitosa utilizando como fase estacionaria una columna C8 5um (250 mm x 4,6mm) o equivalente a L7 según la USP 37, la fase móvil fue una mezcla de acetonitrilo y agua en gradiente, flujo 1.4 ml/min, temperatura de la columna 75ºC y detección con Arreglo de Diodos a 210nm. El método fue validado con los siguientes parámetros: especificidad, linealidad, precisión, exactitud, límite de detección y límite de cuantificación. También se realizó la prueba de aptitud del sistema. El método fue específico para la Ciclosporina A, la respuesta fue lineal en el rango de 100 a 1000 ng/mL de concentración del analito. El valor del coeficiente de variación o desviación estándar relativa (C.V. o DSR) para la precisión fue óptimo. La recuperación media fue de 103,06%. Y el límite de detección y cuantificación resultaron óptimos para la cuantificación de Ciclosporina en sangre total en el rango definido. Finalmente el método cromatográfico nos permitió separar y cuantificar a la Ciclosporina A presente en las muestras de sangre de pacientes con transplante renal.

Abstract This study describe the validation method for the quantification of Cyclosporin A in Whole Blood by Liquid Chromatography High Efficiency (HPLC) in reverse phase. Cyclosporine A is immunosuppressant United Nations UN the narrow scam therapeutic margin: In addition to its extensive ¿variability in pharmacokinetic processes justify their monitoring dose Patients with organ transplants paragraph Avoid Side Effects and poaible organ rejection transplanted. Separation of Cyclosporine A of a matrix complex as the blood was carried out successfully using as the stationary phase C8 column, the mobile phase is a mixture of acetonitrile and water gradient, flow 1.4 ml / min, Temperature column was 75 ° C detection 210 nm in one. The method was validated with the following parameters: specificity, linearity, precision, accuracy, limit of detection and limit of quantification. Aptitude Test System was also performed. Was Method Specific for Cyclosporin A, the response was linear in the range 100 a 1000 ng/mL concentration of the analyte. The coefficient of variation or relative standard deviation (RSD or CV) for the precision was optimal. Recovery media WAS 103,06%. And the limit of detection and quantification were optimal for the quantification of total Cyclosporine in blood in the range defined. Finally Chromatographic Method allowed us to separate and quantify Cyclosporin A in samples of patients with renal transplantation.

Sign and symbol in society, educational challenges

Resumen El proceso de educativo es dinámico y en la mayoría de su accionar se realiza dentro de un aula bajo ciertos procesos metodológicos establecidos a nivel nacional, regional e incluso mundial, dirigido a un sector de la población con características muy particulares. La pregunta es ¿será posible complementar los procesos de alfabetización en otros lugares y bajo otros procesos de aprendizaje-enseñanza tomando en consideración el contexto y la sensibilidad cognitiva del que se alfabetiza? La respuesta a esta interrogante es afirmativa, tomando como eje la capacidad que cada sujeto tiene para desarrollar su espacio metacog-nitivo complejo.

Abstract The process of teaching literacy is dy-namic and in the majority of its to drive is carried out inside a classroom under cer-tain methodological processes established to national, regional and even world lev-el, directed to a sector of the population with very private characteristics. The question is ¿will be possible to complement the processes of teaching literacy in other places and under other processes of learning-teaching taking in consideration the context and the cognitive sensibility of the one that is alphabetized? The answer to this ques-tioning one is affirmative, taking as axis the capacity that each subject has to develop its space metacognitive complex.

Importance of the general examination of urine, in the preliminary diagnosis of pathologies of renal and systemic urinary routes, in apparently healthy women

Resumen El examen general de orina (EGO) es una examen de rutina, rápido, de bajo costo y fácil acceso en los servicios de salud para la población. Además proporciona información importante para el diagnóstico de diversas enfermedades como infecciones del tracto urinario, diabetes y enfermedades renales. Este examen comprende de: el examen físico, el examen químico y el análisis microscópico del sedimento urinario. Se realizó un estudio descriptivo, de corte trasversal en el cual se procesaron 302 muestras de orina provenientes de mujeres aparentemente sanas de primer año de la Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas (FCFB) y su entorno familiar, además no se incluyó mujeres embarazadas y aquellas que cursaban su ciclo menstrual. El objetivo del estudio fue que los estudiantes de primer año de la Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas (FCFB) realicen correctamente el EGO analizar los resultados obtenidos, para relievar la importancia de este examen de laboratorio, en el diagnostico de algunas enfermedades. Los resultados del EGO mostraron en algunas muestras, alteraciones en parámetros como: El aspecto, nitritos positivos, cantidad de bacterias y leucocitos, los cuales se ven asociados a infecciones del tracto urinario. Así también la presencia de glucosa en orina nos hace sospechar de diabetes. En ambos casos se recomendó a las participantes acudir a su médico, confirmar la sospecha con exámenes específicos y realizar el tratamiento adecuado. Por lo tanto el estudiante debe estar consciente de la importancia de realizar correctamente el EGO ya que los resultados del mismo ayudan al diagnóstico de algunas enfermedades

Abstract The general urine test (EGO) is a routine test, fast, low cost and easy access in health services for the population. It also provides important information for the diagnosis of various diseases such as urinary tract infec-tions, diabetes and kidney diseases. This test includes: physical examination, chemical examination and microscopic analysis of the urinary sediment. A descriptive, cross-sectional study was conducted in which 302 urine samples from apparently healthy first-year women of the Faculty of Pharmaceutical and Biochemi-cal Sciences (FCFB) and their family envi-ronment were processed, in addition to af-fected women who were not included. They were in their menstrual cycle. The objec-tive of the study was that first-year students of the Faculty of Pharmaceutical and Bio-chemical Sciences (FCFB) correctly perform the EGO to analyze the detected results, to highlight the importance of this laboratory test, in the diagnosis of some diseases. The results of the EGO detected in some samples, alterations in parameters such as: The appearance, positive nitrites, quantity of bacteria and leukocytes, which are asso-ciated with urinary tract infections. So also the presence of glucose in urine makes us suspect diabetes. In both cases, participants were advised to go to their doctor, confirm the suspicion with specific tests and perform the appropriate treatment. Therefore, the student must be aware of the importance of correctly performing the EGO and the results of the same help the diagnosis of some diseases.