Revista CON-CIENCIA

Evaluation of the performance indicators of 3M Petrifilm Staph Express (STX) against the ISO 6888-1: **2003 standard in the count of Staphylococcus aureus in fresh cheeses by artificial contamination**

Resumen Staphylococcus aureus puede contaminar una gran gama de alimentos, siendo los quesos frescos un medio diferencial y selectivo para el desarrollo de este microorganismo, llegando a la producción de enterotoxina termoestable ocasionando una intoxicación estafilocóccica trasmitida por alimentos. El empleo del método 3M Petrifilm Staph Express (STX) supone considerables ventajas frente al método convencional o de referencia, facilitando y favoreciendo muchos aspectos técnicos y económicos, dentro de ellos tenemos la optimización de tiempo en cuanto se refiere a la preparación de medios de cultivo, necesidad de equipamiento, requerimiento de infraestructura, menor requerimiento de personal y la disminuye los costos del uso de consumo eléctrico, disminuye la generación de residuos sólidos, entre otros. La comparación entre el método alternativo frente al método convencional fue hecha por medio de la contaminación artificial de una matriz libre de S. aureus y un recuento bajo de microbiota acompañante, donde se establecieron diferentes niveles de contaminación, evaluándose los indicadores de desempeño (exactitud relativa, precisión relativa, linealidad, curva de calibración y límite de cuantificación). En indicador de exactitud relativa se obtuvo un 95,6% de recuperación para el nivel más bajo (aproximadamente 8 UFC/g) y 98,7% de recuperación para el nivel de contaminación más alto (aproximadamente 5300 UFC/g), teniendo un rango de 70 a 120% de aceptación. Para la precisión relativa se calcularon la RSD de todos los niveles ensayados, obteniéndose datos que aceptan la precisión relativa del método de placa seca rehidratable porque los valores fueron menores al RSD teórico calculado. El límite de detección fue ensayado con <10UFC/g obteniéndose un CV de 1,16%. Por los resultados obtenidos podemos concluir que el método 3M Petrifilm Staph Express (STX) cumple con los indicadores de desempeño frente a la norma ISO 6888-1:2003.

Abstract Staphylococcus aureus can contamínate a wide range of foods, being fresh cheeses a differential and selective medium for the development of this microorganism, reach-ing the production of thermostable entero-toxin causing a staphylococcal intoxication transmitted by food. The use of the 3M Petrifilm Staph Express (STX) method has considerable ad-vantages over the conventional or reference method, facilitating and favoring many tech-nical and economic aspects, within them we have the optimization of time as regards the preparation of culture media, need for equipment, infrastructure requirements, lower personnel requirements and decreas-es the costs of the use of electricity con-sumption, decreases the generation of solid waste, among others. The comparison between the alterna-tive method and the conventional method was made by means of the artificial contam-ination of a free matrix of S. aureus and a low accompanying microbiota count, where different levéis of contamination were es-tablished, evaluating the performance indi-cators (relative accuracy, relative precisión, linearity, calibration curve and limit of quan-tification). In the relative accuracy indicator, 95.6% recovery was obtained for the lowest level (approximately 8 CFU / g) and 98.7% recovery for the highest level of contamination (approximately 5300 CFU / g), with a range of 70 to 120% acceptance. For the relative precision, the RSD of all the tested levels was calculated, obtaining data that accept the relative accuracy of the dry rehydratable plate method because the values were low-er than the calculated theoretical RSD. The limit of detection was tested with <10 CFU / g, obtaining a CV of 1.16%. Based on the results obtained, we can conclude that the 3M Petrifilm Staph Express (STX) method complies with the performance indicators againstthe ISO 6888-1: 2003 standard

Deworming in children of rural schools 2016 -2017: Diagnosis and Treatment of intestinal enterocoparasites in Sapecho A School - Sud Yungas, La Paz

Resumen Los parásitos intestinales son un grave problema de salud pública donde la alta preva-lencia está asociado a la falta de educación sanitaria, hábitos higiénicos e infraestructura inadecuada. El presente trabajo es un estudio descriptivo de corte transversal, donde el universo de trabajo son todos los niños de la Escuela Sapecho A (Gestión 2016-2017), trabajo que involucro a estudiantes de pregrado y de post grado de la Facultad de Ciencia Farmacéuticas y Bioquímicas, donde a través de estudios co-proparasitológicos (técnica de Ritchie) se pudo observar que la mayoría de la población, entre 78,24 y 88,4%, se encontraba infectada por uno o más parásitos (Helmintos-Protozoos). Luego de realizar una desparasitación masiva con albendazol (400mg/Dos dosis) se llegó a una reducción respecto a los helmintos de 53,5 y 65,2% respectivamente en cada gestión, sin embargo, este no fue efectivo contra los protozoos. Para alcanzar un éxito en el tratamiento se debe tratar al grupo familiar y dar énfasis al componente educativo de higiene y limpieza.

Abstract Intestinal parasites are a serious public health problem where the high prevalence is associated with a lack of education, inade-quate hygienic habits and sanitary infrastruc-ture.The present work is a cross-sectional de-scriptive study, where the universe of work are the children of Sapecho A School (Management 2016-2017), work that involved under-graduate and post-graduate students of the Faculty of Pharmaceutical Science and Bio-chemistry where through coproparasitological studies (Ritchie's technique) it was observed that the majority of the population, between 78.24 and 88.4%, was infected by one or more parasites (Helminths-Protozoa). After perform-ing a massive deworming treatment with al-bendazole (400mg/Two doses) a reduction was reached with respect to the helminths of 53.5 and 65.2%, respectively in each year, howev-er this was not effective against the protozoa. To achieve a successful treatment, the fami-ly group must be treated and the educational component of hygiene and cleanliness should be emphasized.

Pilot study of intestinal parasitosis diagnostic and response to Mebendazol on school age children at schools in Charcas II, El Sillar and La Cascada, year 2010 La Paz.

Resumen El proyecto IDH 09: "Desparasitación de niños en escuelas rurales", llevo adelante un trabajo piloto experimental de diagnóstico sobre parásitos intestinales en niños en las Escuelas de las Comunidades: Charcas II; La Cascada y El Sillar, Provincia Sud Yungas, Departamento de La Paz, Bolivia. El análisis coproparasitológico fue en 93 muestras tomadas entre Inicial y quinto de primaria, con edades entre 5 y 12 años. En promedio, el 97,9% de las muestras indicaron presencia de Protozoarios y hasta un 54,5% de Helmintos, concomitantemente, con una relación promedio de 2,0 veces más Protozoarios. En las escuelas de Charcas II y La Cascada la relación fue de 1,8 y en El Sillar fue de 2,5. Hasta 12 parásitos fueron identificados entre los Protozoarios: Blatocystis hominis (92,7%); Entamoeba coli (50,3%); Endo-limax nana (44,0%); Giardia lamblia (39,3%); lo-damoeba bütschlii (25,0%) y Chilomastix mesnili (8,3%) y entre los Helmintos: Ascaris lumbricoi-des (30,0%); Uncinaria spp (21,7%), Strongyloides stercoralis (9,0%); Hytnenolepis nana (7,0%) y Tri-churís trichiura (5,7%), en una muestra se detectó Enterobius vermicularis. En la escuela Charcas II, de acuerdo a sus programas de desparasitación, los niños recibieron tratamiento con Mebenda-zol y el efecto de la medicación fue evaluado, aleatoriamente, a los 7 días, sobre un total de 21 niños. El Mebendazol (1200mg) elimino 50% de los Helmintos. A lumbricoides fue eliminado de todas las muestras, Uncinaria spp, S. stercoralisy T. trichiura fueron eliminados en un 50%, mientras que H. nana persistió en todas las muestras, mientras que los Protozoarios fueron eliminados solo en un 19% de las muestras.

Abstract The Project "Deworming of children in rural schools" carried out a pilot experimental field work to determine intestinal para-sites levels in kids in rural schools, at Charcas II, La Cascada and El Sillar communities, South Yungas province, Department of La Paz, Bolivia. The coproparasitologic studies were carry out on 93 feces samples, from kids from initial to fifth grade, within ages from 5 to 12 years. An average of 97,9% of the samples showed presence of protozoa parasites and up to 54,5% showed, additionally, presence of Helminthes, with a general ratio of Protozo-an to Helminthes of 2,0. At Charcas II School and La Cascada School the ratio was of 1,8; while at El Sillar gave a ratio of 2,5. A total of 12 parasites were identified, among the protozoa: Blatocystishominis (92,7%); Entamoeba coli (50,3%); Endolimax nana (44,0%); Giardia lamblia (39,3%); lodamoeba bütschlii (25,0%) and Chilomastix mesnili:(8,3%) and among the Helminthes: Ascaris lumbriocoides (30,0%); Uncinaria spp (21,7%), Strongyloides stercoralis (9,0%); Hymenolepis nana (7,0%) and Trichuris trichiura (5,7%) and in one sample we detected Enterobius vermicularis. Accord-ing to their deworming program, at Charcas II School, kids received treatment with Mebendazol (1200mg) and the effectwas evaluated 7 days after treatment. On a total of 21 children. Mebendazol eliminated 50% of Helminthes. A lumbricoides was eliminated from all samples; Uncinaria spp, S. stercoralis y T. trichiura only from 50% of the samples and H. nana persist-ed in all samples, while Protozoan parasites were eliminated on nearly 19% of the samples.

The educational process from complex thinking

Resumen Entender en primer lugar que el ser humano se hace ver como un sujeto finito, con un ciclo que cumplir en el que nace, crece, se reproduce y muere es un grave error, ya que desde la complejidad somos infinitos, somos materia y energía, somos cuerpo y espíritu, somos cambiantes, llenos de incertidumbres, de entretejidos en todos los niveles. Algunos en la cotidianidad lo llamamos ¡dificultad! Y nos cuestionamos diciendo ¿por qué la vida es tan difícil y complicada? Cuando realmente lo que hacemos es vivir en complejidad. Una de las principales interrogantes que desde la complejidad puede el joven incorporar como parte de un pensar desde la complejidad, es que los problemas son parte de nuestra vida, están en la incertidumbre y los cultivo como interrogantes que generan más problemas, que son parte de mi reto de vida, de su ser y espiritualidad. Son parte de la adversidad de la vida que se presentan como elementos vinculantes para seguir entendiendo la vida como un todo y una parte.

Abstract Understand first that the human being ¡s seen as a finite subject, with a cyde to fulfill ¡n which ¡t ¡s born, grows, reproduces and dies ¡s a serious error, since from complexity we are infinite, we are matter and energy, we are body and spirit, we are changeable, full of un-certainties, of interwoven at all levels.Some in everyday life we cali it diff iculty! And we ques-tion ourselves by saying why life is so difficult and complicated? When what we really do is live in complexity. One of the main questions that the young person can incorporate as part of a complexi-ty-based thinking is that the problems are part of our lives, are in uncertainty and are raised as questions that generate more problems, which are part of the my challenge of life, of its being and spirituality. They are part of the adversity of life that are presented as binding elements to continue understanding life as a whole and a apart

Self-medication Profile in Students Entering the Faculty of Chemical Sciences in the year 2015

Resumen Introducción: La automedicación es una práctica riesgosa cuyas consecuencias incluyen enmascaramiento de una enfermedad, aparición de reacciones adversas, interacciones medicamentosas, aumento de la resistencia a ciertos tipos de fármacos y farmacodependencia. Objetivo: Determinar el perfil de auto-medicación en estudiantes de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Nacional de Asunción. Metodología: Estudio descriptivo, obser-vacional, con muestreo no probabilístico y por conveniencia realizado en mayo del 2016, a 115 estudiantes universitarios que ingresaron en la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Nacional de Asunción en el año 2015. Resultados: La edad promedio fue 20 años, en su mayoría mujeres. Consumían medicamentos 85 estudiantes, de los cuales 38 estudiantes se automedicaban para patologías menores, 25 lo hacían por necesidad, utilizaban mezcla de analgésicos y antiinflamatorios, los motivos más frecuentes 42% no creía necesario ir al médico y 68% fue un familiar o amigo el que le sugirió el medicamento que debía consumir. De los 115 estudiantes que participaron el 60% considera que la publicidad no es importante para elegir un medicamento, el 63% utiliza la información del prospecto. El 57% recibe información sobre el medicamento en la farmacia y el 92% considera que la automedicación es peligrosa. Conclusión: La automedicación es una práctica común en la población universitaria estudiada y en su entorno social inmediato. El 45% de los encuestados reconoce haber tomado medicación sin prescripción médica y el 66 % lo hace habitualmente, a pesar de que el 92% de la población entiende que la automedicación constituye una práctica riesgosa.

Abstract Introduction: Self-medication is a dan-gerous practice whose include the masking of a disease, the occurrence of adverse reac-tions, drug interactions, increased resistance to certain drug types, and drug dependence. Objective: to determine the self-medication profile of students from the Faculty of Chemical Sciences from the National University of Asunción Methodology: This is a descriptive, ob-servational study with a non-probabilistic and convenient sampling performed in May 2016 to a population of 115 university students entering the Faculty of Chemical Sciences of the National University of Asunción in the year 2015. Resulte: The average age of the popula-tion ¡n study was 20 years oíd, mostly wom-en. 85 of them consumed drugs, 83 stu-dents self-medicated for minor pathologies, 25 did ¡t out of necessity using a mixture of painkillers and anti-inflammatories. The most frequent reasons were that 42% did not consider did not think it necessary to go to the doctor while 68% did so at the sug-gestion of a family member or friend who indicated the medication to be consumed. Out of 115 studente that participated 60% consider that advertising is not important when it comes to choosing a drug, 63% uti-lizes the prospect information, and 57% get the information at the drug store. 92% consider that self-medication is dangerous. Conclusión: Self-medication is a com-mon practice among the university popula-tion studied here as well as in their imme-diate environment. 45% recognize having taken drugs without a prescription, 66% self-medicates customarily even though 92% of the studied population understand that self-medication is a risky practice.

**Glycemic Index of a product made from amaranthus (Amaranthus caudatus Linnaeus), quinoa (Chenopodium quinoa Willd) and tarwi (Lupinus mutabilis Sweet) to adjuvant treatment of diabetes type 2 and obesity**

Resumen El índice Glucémico (IG) es un parámetro que indica el impacto agudo de los carbohidratos de un alimento sobre los niveles de Glucosa en sangre, por tanto, la cantidad y tipo de carbohidratos son los principales factores determinantes de la glucemia. En diabéticos, los alimentos con IG bajo tienen un impacto favorable en el control de glucemia, mejoran la resistencia a la insulina e incrementan el HDL-Colesterol; además, en personas sanas reducen el riesgo para desarrollar diabetes y enfermedades cardiovasculares. En este trabajo se determinó el IG de un producto elaborado a base de harinas de amaranto (Amaranthus caudatus Linnaeus), quinua (Chenopodium quinoa Willd) y tarwi (Lupinus mutabilis Sweet) (Producto nutracéutico: "AQT Regulador Metabólico") mediante la respuesta glucémica postprandial después de su consumo por voluntarios sanos, en comparación con la glucosa anhidra (alimento de referencia) para corroborar su potencial rol nutracéutico como tratamiento coadyuvante de la DM2 y/o regulador metabólico en obesos no diabéticos con o sin resistencia a la insulina. Este estudio reveló que tras 15 y 30 min del consumo de glucosa anhidra, la glucemia en el grupo control alcanzó unos picos máximos de 115 y 118mg/dl_ respectivamente, mientrasque, tras el consumo de producto nutracéutico: "AQT Regulador Metabólico" los picos máximos a los mismos tiempos fueron de 95,4 y 106,4 mg/dL respectivamente. La curva de tolerancia para el producto "AQT Regulador Metabólico"fue más plana en comparación con la glucosa anhidra y estas diferencias fueron estadísticamente significativas. La comparación de las áreas bajo la curva indica que el IG del producto: "AQT Regulador Metabólico" es igual a 30,6 % que es considerado como un IG bajo, por tanto, el producto es un complemento alimenticio aconsejable en la dieta de pacientes diabéticos, debido a que el incremento de glucemia postprandial no es significativo en comparación con la glucosa.

Abstract The Glycemic índex (Gl) is a parameter that indicates the acute impact of carbohydrates in a food on the levéis of Glucose in blood, there-fore, the amountand type of carbohydrates are the main determinants of glycaemia. In diabet-ics, foods with low Gl have a favorable impact on glycemic control, improve insulin resistance and increase HDL-Cholesterol; in addition, in healthy people they reduce the risk of develop-ing diabetes and cardiovascular diseases. In this work, the GI ofaproduct made from amaranth (Amaranthus caudatus Linnaeus), quinoa (Chenopodium quinoa Willd) and tarwi (Lupinus mutabilis Sweet) (Nutraceutical product "AQT Metabolic Control") was determined by the postprandial glycemic response after its consumption by healthy volunteers, compared to anhydrous glucose (reference food) to corroborate its potential nutraceutical role as a co-adjuvant treatment of DM2 and/or metabolic regulator in non-diabetic obese patients with orwithoutinsulin resistance. This study revealed thatafter 15 and 30 min of the consumption of anhydrous glucose, the glycaemia in the control group reached maxi-mum peaks of 115 and 118 mg/dL respectively while, after the consumption of the nutraceuti-cal product "AQT Metabolic Control" máximum peaks at the same times were 95,4 and 106,4 mg/ dL respectively. The tolerance curve for the prod-uct "AQT Metabolic Control" was flatter com-pared to anhydrous glucose and these differenc-es were statistically significant The comparison of the areas under the curve indicates that the IG of the product "AQT Metabolic Control" is equal to 30,6 % that is considered as a low Gl, therefore, the product is a recommended dietary supple-ment in the diet of diabetic patients, due to that the increase in postprandial glycaemia is not significant compared to glucose.

Epidemiological, serological and molecular study of the chagas disease in the bolivian amazon

Resumen El presente estudio es parte del proyecto PIA-ACC.UMSA.01 "Búsqueda de Nuevas Zonas Endémicas de la Enfermedad de Chagas en la Amazonia Boliviana como efecto del Cambio Climático" el cual nos ha permitido realizar el estudio epidemiológico - serológico y molecular de la enfermedad de Chagas en personas asin-tomáticas habitantes de seis regiones de la Amazonia Boliviana: Riberalta; Guayaramerín; Cobija; Trinidad; San Joaquín y San Borja, quienes en su mayoría pertenecían a los diversos pueblos indígenas, afectados por la pobreza. La exploración clínica y las pruebas de diagnóstico serológico y molecular de la enfermedad de Chagas se realizaron a la población de cada región sin costo. La participación de la gente fue coordinada con la Central de Pueblos Indígenas del Beni y mediante la firma del consentimiento informado se sometieron al estudio todos los participantes voluntarios. Un total de 338 muestras fueron procesadas con las pruebas serológicas de ELISA; HAI e IFl y la prueba molecular de la PCR en punto final. La seropositividad fue del 6,2% (21 casos) y la PCR fue positiva en 3,8% (13 casos). Del total de casos Chagas positivo, el 42% fueron casos de migrantes de regiones endémicas como Cochabamba, Santa Cruz, Chuquisaca y Yungas de La Paz, Asimismo, se identificaron a los principales factores de riesgo asociados a la enfermedad constatando entre otros aspectos que los habitantes de estas regiones tienen escaso conocimiento sobre la enfermedad de Chagas; sin embargo están conscientes sobre la aparición de enfermedades extrañas en estas regiones debido a las variaciones climatológicas detectadas en los últimos años y evidencian su preocupación sobre los efectos negativos del cambio climático.

Abstract The present study is part of the project PIA-ACC.UMSA.01 "Search for New EndemicAreas of Chagas Disease in the Bolivian Amazon as an effect of Climate Change", which has allowed us to carry out the epidemiological - serological and molecular study of Chagas disease in as-ymptomatic people living in six regions of the Bolivian Amazon: Riberalta; Guayaramerín; Cobija; Trinidad; San Joaquín and San Borja, who in their majority belonged to the diverse in-digenous towns, affected by the poverty. Clini-cal exploration and serological and molecular diagnostic tests of Chagas disease were per-formed on the population of each region at no cost The participation of the people was co-ordinated with the Central de Pueblos Indígenas del Beni (Central de Pueblos Indígenas del Beni) and by signing the informed consent all the volunteer participants were submitted to the study. A total of 338 samples were processed with the ELISA serological tests; HAI and IFI and the molecular test of the PCR at the end point The seropositivity was 6.2% (21 cases) and the PCR was positive in 3.8% (13 cases). Of the total positive Chagas cases, 42% were cases of migrants from endemic regions such as Cochabamba, Santa Cruz, Chuquisaca and Yungas de La Paz. Likewise, the main risk factors asso-ciated with the disease were identified, noting among other aspects that inhabitants of these regions have little knowledge about Chagas disease; however, they are aware of the appearance of strange diseases in these regions due to the climatic variations detected in recent years and evidence their concern about the negative ef-fects of climate change

Towards the incentive of entrepreneurs biochemical professionals from the University: Biotechnology in Bolivia and Business Development

Resumen La presente revisión contiene una descripción de la importancia de la Biotecnología y las oportunidades potenciales en el desarrollo de empresas en Bolivia para el profesional Bioquímico. La información pretende realizar una comparación de las diferentes formas de creación de empresas exitosas, que coadyuve a incentivar el espíritu emprendedor en los profesionales bioquímicos bolivianos. Se mencionan los tipos de biotecnología, las formas a través de las cuales otros países apoyan a la generación de nuevas empresas con base tecnológica, se aborda las formas de generar valor agregado a través de la creación de patentes y la importancia de proteger la propiedad intelectual como una forma de preservar la innovación de los emprendimientos, siendo que esta es la principal característica de una empresa exitosa. Bolivia cuenta con un gran potencial humano y calificado, una gran biodiversidad como para desarrollar la biotecnología a través de empresas privadas y estatales. Las universidades están llamadas a ser gestores de cambio en la mentalidad de las nuevas generaciones de profesionales, para contar con bioquímicos emprendedoresy más aun, profesionales innovadores.

Abstract The present review contains a description of the importance of biotechnology and the potential opportunities in the development of Enterprises in Bolivia for the biochemical pro-fessional. The information aims to make a com-parison of the differentforms of creation of suc-cessful companies, which helps to incentivize the entrepreneurial spirit in the Bolivian biochemical professionals. The types of biotechnology are mentioned, the ways in which other countries support the creation of new technology-based companies, the ways of generating added value through the creation of patents and the importance of pro-tecting intellectual property are addressed. as a way to preserve the innovation of entrepreneur-ship, being that this is the main characteristic of a successful company. Bolivia has great human and qualified potential, greatbiodiversity to develop Biotechnology through prívate and state companies. Uni-versities are called to be managers of change in the mentality of the new generations of pro-fessionals, to have entrepreneurial biochemists and, even more, innovative professionals.

**Design and Evaluation of primers in silico of the E1 gene of chukungunya virus for Real-Time PCR (q PCR)**

Resumen El diseño de primers es una parte sustancial dentro de los ensayos de PCR, el mismo es aplicado en la caracterización de microorganismos, secuenciación, cuantificación, etc. En los últimos años se ha incrementado herramientas para este fin, se realizaron nuevas variantes, crearon nuevos enfoques, muchas de estas herramientas son de licencia comercial y otros de acceso libre y código abierto permiten al usuario mejorar o modificar según requerimiento el diseño de primers. En este trabajo comparamos las características básicas dentro del diseño de primers, empleando 2 tipos de herramientas web de acceso libre y código abierto: Primer-BLAST y Primer3Plus, se realizó el diseño in silico, análisis de estructuras secundarias y verificación de la especificidad de los primers obtenidos. Los resultados mostraron que el uso de variables adicionales o uso de penaltis mediante el software Primer-3Plus afectan en la especificidad, formación de estructuras secundarias de los primers y de los amplicones. Además, se determinó que los parámetros que tienen muchos software por defecto, no aseveran el diseño de primers convenientes y/o específicos, en este sentido es importante realizar el uso de penaltis. Asimismo, se identificó que el uso de Primer3Plus ha permitido disminuir la formación de estructuras secundarias, sin afectar la especificidad de amplificación del marcador seleccionado.

Abstract Primer design is a substantial part of PCR assays, which is used in characteriza-tion of microorganisms, sequencing, quanti-fication, etc. In recent years, new tools have been added for this purpose, new variants and approaches have been created, many of these tools are commercial and others are free including open source, giving the pos-sibility to improve or modify as required. In this work, we compared the basic charac-teristics of the primers design, using 2 types of free and open source web tools, Primer-BLAST and Primer3Plus, in this sense the in silico design, analysis of secondary struc-tures and verification of primers designed. The results showed that the use of addi-tional variables or use of penalties using the software Primer3 Plus affect in specificity, secondary structures formation in primers and in the products of amplification. In ad-dition, default parameters, that many software have, do not imply that suitable and / or specific primers can be obtained, mean-ing the importance of the use of penalties. Therefore, the use of Primer3Plus has al-lowed to decrease the formation of second-ary structures without affecting the ampli-fication specificity of the selected marker.