Journal of the Selva Andina Research Society

Improvement of molecular techniques: A multidisciplinar vision

**Presence survival spores of Bacillus thuringiensis varieties in grain warehouse**

El género de Bacillus thuringiensis (Bt) sintetiza esporas y cristales tóxicos para insectos-plaga agrícolas. La especie de Bt es cosmopolita, por lo que es posible aislar subespecies de granos almacenados dado que las esporas persisten por más tiempo ahí que en la intemperie. Los objetivos del trabajo fueron: i) aislar subespecies de Bt de granos almacenados ii) evaluar la toxicidad de esos Bt en Spodoptera frugiperda y Shitophilus zeamaisese iii) analizar la persistencia de esas esporas en granos de Zea mays almacenados y expuestos al ambiente abierto. Los resultados indican que existen esporas de subespecies de Bt en granos almacenados. De acuerdo con el aislado Bt1 o Bt2 fueron tóxicos para S. frugiperda y S. zeamaisese. Se sugiere que una de esos Bt fue la var morrisoni. Esas esporas en granos de Z. mays almacenado superviveron más tiempo, que las expuestas a la radiación solar, eliminadas por radiación solar biocida.

Genus Bacillus thuringiensis (Bt) synthesized spores and crystals toxic to pest-insects in agriculture. Bt is comospolitan then possible to isolate some subspecies or varieties from warehouse. The aims of study were: i) to isolate Bt varieties from grain at werehouse ii) to evaluate Bt toxicity on Spodoptera frugiperda and Shitophilus zeamaisese iii) to analyze Bt spores persistence in Zea mays grains at werehouse compared to same Bt on grains exposed to sun radiation. Results showed that at werehouse were recovered more than one variety of Bt spores. According to each isolate Bt1 o Bt2 were toxic to S. frugiperda or S. zeamaisese. One those Bt belong to var morrisoni. At werehouse these spores on Z. mays grains surviving more time, while the same spores exposed to boicide sun radiation they died.

**Adaptation of indeterminate tomato hybrids [Solanum lycopersicum L. (Mill.)] under greenhouse conditions**

Fueron evaluados 11 híbridos de tomate indeterminado de la empresa ENZA ZADEN y un testigo de la empresa SEMINIS, bajo condiciones de invernadero y laboratorio con los objetivos de: i) evaluar y seleccionar participativamente 11 nuevos híbridos de tomate indeterminado de la empresa ENZA ZADEN, por su adaptación, sus características agronómicas y de sanidad en el ciclo del cultivo, en cosecha y en pos-cosecha y ii) Implementar con agricultores emprendedores, el negocio de los tomates híbridos indeterminados seleccionados participativamente. Los resultados mostraron que las variedades con mayor número de frutos y rendimiento fueron Shanon y Afamia entre las de tipo beef (redondas) y Granadero entre las peras. Las variedades redondas presentaron un rendimiento promedio superior al de las peras. Las variedades peras presentaron un número de frutos promedio superior al de las redondas. Hubo una correlación alta y positiva entre el número de frutos y el rendimiento tanto en peras como en redondas. Las variedades con mayor peso de fruto fueron Bruni (entre las redondas) y Centenario, Granadero y (entre las peras). El peso de fruto se reduce en el tiempo en forma lineal para todas las variedades excepto Corleone. La variedad redonda con mayor firmeza de fruto fue Shannon. No hubo diferencia en firmeza entre las peras. La firmeza de fruto reduce en el tiempo en forma lineal para las variedades Bruni, Elpida, Hechicero, Rally, Centenario, Corleone y reduce en forma lineal pero incrementa en forma cuadrática para las variedades Maradona y Shannon. Las variedades que redujeron la firmeza de sus frutos a menor velocidad fueron Corleone, Centenario y Afamia. Las variedades con menor pH fueron Afamia (entre las redondas) y Centenario y Granadero (entre las peras). El pH incrementa en el tiempo en forma lineal en todas las variedades. Las variedades con mayor contenido de Grados Brix fueron Hechicero, Afamia, Granadero, Elpida, Rally, Maradona y Sebatina (entre las redondas) y Corleone (entre las peras). El contenido de Grados Brix incrementa en forma lineal en el tiempo en todas las variedades. Existieron correlaciones significativas altas y positivas entre Grados Brix y pH; y entre peso y firmeza de fruto. Se logró la selección participativa de las variedades Elpida, Rally (redondas), Centenario y Policarpo (Peras), que ahora son las que se están produciendo comercialmente en los invernaderos de EL Paso en Cochabamba.

Were evaluated 11 hybrids of indeterminate tomato company by ENZA ZADEN and a witness of the company SEMINIS, under greenhouse and laboratory with the objectives of: i) evaluate and participatory select 11 new hybrids of indeterminate tomato company ENZA ZADEN by adaptation, agronomic and health in the crop cycle, in harvest and post-harvest and ii) implement farmers with entrepreneurial characteristics, business participatory hybrids selected indeterminate tomatoes. The results showed that varieties with higher number of fruits and yield were Shannon and Afamia between type beef (round) and Granadero between pears. The round varieties had a higher average yield of pears. Pears are a number of varieties had higher than average round fruits. There was a high positive correlation between the number of fruits and yield both pears and round. The varieties with higher fruit weight were Bruni (between the round) and Centenario, Granadero and (from pears). Fruit weight in time is reduced linearly for all varieties except Corleone. The round variety with greater firmness fruit was Shannon. There was no difference in firmness between the pears. The firmness of fruit reduced linearly time for Bruni, Elpida, Hechicero, Rally, Centenario, Corleone and varieties and reduces linearly but increases quadratically for Maradona and Shannon varieties. The varieties that reduced fruit firmness were slower Corleone, Centenario and Afamia. The varieties with lower pH were Afamia (between the rounds) and Centenario and Granadero (from pears). The pH increases over time in linear form in all varieties. The varieties with higher content of Brix were Hechicero, Afamia, Granadero, Elpida, Rally, Maradona and Sebatina (between the rounds) and Corleone (from pears). Brix content increases linearly over time in all varieties. There were high and positive significant correlations between Brix and pH; weight and firmness of fruit. Participatory selection of varieties Elpida, Rally (round), Centenario and Policarpo (Pears), which are now commercially that, are taking place in the greenhouses of El Paso in Cochabamba was achieved.

Biostimulation of soil polluted 10000 ppm of waste motor oil and phytoremediation with Cicer arietinum improved by Bacillus cereus/Rhizobium etli

La contaminación de suelo con aceite residual automotriz (ARA) disminuye su productividad. Una alternativa para su eliminación es la bioestimulación (BS) con un abono animal y posterior fitorremediación (FR) con una leguminosa potenciada con bacterias promotoras de crecimiento vegetal (BPCV), para reducirlo a nivel inferior al límite máximo permisible de 4400 ppm de acuerdo con la NOM-138-SEMARNAT/SSA1-2012 (NOM-138). Los objetivos de este trabajo fueron: i) bioestimulación de un suelo contaminado con 10000 ppm de ARA con lombricomposta y ii) ulterior Fitorremediación con Cicer arietinum y Bacillus cereus /Rhizobium etli. En la BS del suelo la variable respuesta fue la concentración del ARA, mientras en la FR la fenología y biomasa de C. arietinum y la concentración del ARA remanente. Los resultados mostraron que en suelo la BS con lombricomposta al 3% en 3 meses el ARA se redujo a 1370 ppm. En tanto que la FR con C. arietinum y R. etli, redujo el ARA hasta 30 ppm ambos valores inferiores al máximo permitido por la NOM-138. Lo anterior apoya que en suelo contaminado con ARA, la mejor opción de biorrestauración, es la estrategia integral BS y FR potenciada con géneros de BPCV.

Soil pollution by waste motor oil (WMO) is reducing its productivity. An alternative for removing WMO from soil is by biostimulation (BIS) applying animal manure and then phytoremediation (PR) by legume improving with plant growth promoting bacteria (PGPB) to reduce WMO concentration at level below 4400 ppm limit permit for the NOM-138-SEMARNAT/SSA1-2012 (NOM-138). The aims of this research were: i) to analyze soil biostimulation polluted by 10000 ppm of WMO applying vermicompost, then subsequent soil phytoremediation with Cicer arietinum inoculated by Bacillus cereus and/or Rhizobium etli. In soil after applying BS by VC was measured WMO soil concentration and ii) for PR was regarded phenology and biomass of C. arietinum and WMO concentration remaining at the end of this step. The results showed that soil biostimulated by VC, WMO was reduced at 1370 ppm, subsequent PR sowing C. arietinum with R. etli, WMR was reduced at 30 ppm concentration both values below to maximum value accepted by NOM-138. Those data indicate that in soil polluted by WMO the best way to biorecovery soil was to integrate strategy BS/PR the last one improved by genus of PGPB.

Biostimulation of soil polluted by 40000 ppm of waste motor oil and phytoremediation with Cicer arietinum and Burkholderia cepacia

El suelo contaminado con 40000 ppm de aceite residual automotriz (ARA), es una mezcla de hidrocarburos, en concentración relativamente alta según la regulación mexicana al respecto la NOM-138-SEMARNAT/SSA1-2003 (NOM-138), que la define como no mayor a 4400 ppm/kg de suelo. Dado que esa cantidad causa la pérdida de fertilidad, inhibe la vida microbiana y disminuye la producción vegetal. Los objetivos del trabajo fueron i) Bioestimulación del suelo contaminado con 40000 ppm de ARA con lombricomposta y/o composta bovina, ii) Fitorremediación con Cicer arietinum y Burkholderia cepacia para decrecer el ARA a un valor inferior al máximo permisible por la NOM-138. Los resultados indicaron que la bioestimulación del suelo con 40000 ppm de ARA por composta bovina, lo eliminó a 24000 ppm en 49 días. Posteriormente la fitorremediación mediante C. arietinum y B. cepacia a madurez fisiológica lo decrecieron hasta 2760 ppm, concentración menor a la máxima aceptada por la NOM-138. Lo anterior apoya que en la biorremediación de suelo impactado con una relativa elevada concentración de ARA, la mejor opción fue la integración de la bioestimulación y fitorremediación, que aplicar cada una por separado.

Soil polluted by 40000 ppm of waste residual oil (WRO), is a relative high hydrocarbons mix concentration according to Mexican regulation related with as the well know NOM-138-SEMARNAT/SSA1-2003 (NOM-138). Due to cause lost soil´s fertility, inhibiting microbial life and reducing vegetal production. To NOM-138 the highest limit of hydrocarbons mix allowed in soil is equal to 4400 ppm/kg. Aims of this research were: i) Biostimulation of soil polluted by 40000 ppm of WRO by vermicompost and/or bovine compost, ii) Phytoremediation by Cicer arietinum and Burkholderia cepacia to reduce WRO at below value compared to highest according to NOM-138. Results showed that biostimulation of soil with bovine compost eliminated WRO at 24000 ppm in 49 days. Then phytoremediation by C. arietinum and B. cepacia decreased WRO at 2760 ppm value below to compare to highest concentration allowed to NOM-138. It´s concluded that bioremediation of soil impacted by relatively high concentration of WRO, the best strategy was to apply both biostimulation/phytoremediation that separate.

**Biostimulation of soil impacted by 45000 ppm waste motor oil and Phytoremediation with Zea mays by Burkholderia cepacia and Rhizobium elti**

El suelo contaminado con 45000 ppm de aceite residual automotriz (ARA), es una relativa alta concentración de una mezcla de HC alifáticos y aromáticos que inhiben la mineralización de la materia orgánica y disminuyen la fertilidad. Esta concentración es alta acorde con la regulación mexicana: NOM-138-SEMARNAT/SSA1-2012 (NOM-138) porque supera los 4400 ppm/Kg de suelo, que es límite máximo permitido en ese ambiente. Los objetivos de este trabajo fueron i) Bioestimulación (BS) de suelo contaminado con 45000 ppm de ARA con lombricomposta y composta bovina al 3 %; ii) Fitorremediación (FR) con Zea mays potenciada con Burkholderia cepacia y Rhizobium etli y reducción de la concentración de ARA, a valor inferior al máximo aceptado por la NOM-138. El suelo con 45000 ppm de ARA la BS con lombricomposta y composta bovina al 3 %; con la variable-respuesta concentración inicial y final del ARA de la BS. Luego la FR mediante Z. mays potenciado con B. cepacia y R. etli géneros de bacterias promotoras de crecimiento vegetal (BPCV), se usaron la fenología: altura de la planta y longitud de la raíz, y la biomasa: peso fresco aéreo y peso seco aéreo y radical. Los datos experimentales se analizaron por ANOVA y Tukey. Los resultados mostraron que la BS de suelo con 45000 ppm de ARA, lo disminuyo a 21000 ppm; por la FR mediante Z. mays inoculado con B. cepacia/R. etli lo redujeron a 1822.5 ppm; valor inferior al máximo aceptado por la NOM-138. Se concluye que la BS suelo contaminado por una relativa elevada concentración de ARA y ulterior FR por Z. mays y los géneros de BPCV son una alternativa ecológica de remediación, mejor que la aplicación individual de cada una.

Soil contaminated with 45000 ppm of waste motor oil (WMO) is a relatively high concentration of a mixture of aliphatic and aromatic hydrocarbons (HC), inhibits mineralization of organic matter and its fertility. This WMO´ concentration is high according to mexican regulation: NOM-138-SEMARNAT/ SSA1-2012 (NOM-138) related to when it exceeds 4400 ppm/Kg of soil. The aims of the study were: i) BS of contaminated soil by 45000 ppm of WMO with vermicompost and bovine compost 3%, and ii) PR using Zea mays inoculated with B. cepacia and R. etli at value below the maximum allowable by NOM-138. The main response variable of the trial was initial and final concentration of WMO after BS. In PR by Z. mays and PGPB to reduce remaining WMO, were phenological response variables as: plant height and root length and biomass: aerial and root fresh and dry weight. Experimental data were analyzed by ANOVA and Tukey. Results showed that the BS of soil by 45000 ppm of WMO was reduced to 21000 ppm; subsequent FR sowing Z. mays inoculated by B. cepacia decreased to 1822.5 ppm, value below the maximum allowable by NOM-138. BS of contaminated soil by relatively high concentration of WMO and later FR sowing Z. mays and PGPR. Both are an alternative in its remediation that to apply each one alone.

Avaliação de protocolos para extração de DNA Genômico de sangue Bovino

Estudos básicos sobre técnicas de extração de DNA são de extrema importância para o sucesso de trabalhos científicos no campo da biologia molecular. A extração e a purificação de ácidos nucleicos constituem etapas fundamentais para o estabelecimento de posteriores análises genéticas. Objetivou-se neste trabalho avaliar a eficácia de diferentes protocolos de extração de DNA por meio da determinação de quantidade, qualidade e a possibilidade de amplificação por meio de PCR do material genético extraído. Utilizou-se amostras de sangue de dez animais, que foram submetidas à extração de DNA e, logo após à reação em cadeia pela polimerase (PCR). Os resultados das análises obtidas por nanofotometria indicaram que a quantidade e a qualidade do DNA genômico foram consideradas satisfatórias, em todos os protocolos, para a realização da PCR, mas houve diferença estatística significativa entre os parâmetros analisados, tanto na quantidade quanto na qualidade (p < 0.05) do DNA obtido. O protocolo de extração utilizando sangue total foi mais eficiente quanto ao tempo e a qualidade do DNA extraído, entretanto em todos os processos de extração houve ausência de degradação. Também foi demonstrado a possibilidade de amplificação da região do exon 2 do gene da leptina de bovinos no DNA extraído.

Basic studies on DNA extraction techniques are very important for the success of scientific papers in the field of molecular biology. The extraction and purification of nucleic acids are critical steps for establishing further genetic analysis. The objective of this study was to evaluate the efficacy of different protocols for DNA extraction by determining the quantity and quality of extracted genetic material and the possibility of amplification by PCR. We did DNA extraction and PCR of ten bovine blood samples. The test results obtained by spectrophotometry indicated that the quantity and quality of genomic DNA were considered satisfactory in all protocols for PCR. However, there was a statistically significant difference between the parameters measured, both in quantity and in quality (p <0.01). The extraction protocol using whole blood was more efficient in terms of time and quality; there was no degradation in all processes of extraction. It was also demonstrated that the possibility of amplification of the region of exon 2 of the leptin gene in extracted DNA exists.

**Determination better culture medium in the establishment phase for the in vitro propagation of banana (Musa paradisiaca L)**

Este trabajo de investigación fue realizado en el laboratorio de Biotecnología Vegetal del Área de Ciencias Biológicas y Naturales de la Universidad Amazónica de Pando, en el año 2014. El objetivo del estudio fue determinar un mejor medio de cultivo en la fase de establecimiento para la propagación in vitro de plátano (Musa paradisiaca L). Fueron seleccionadas y caracterizadas 20 plantas madres del CINTA (Centro Investigación de Nuevas Tecnologías de la Amazonia). Se empleó un diseño completamente aleatorio (DCA) con tres diferentes medios de cultivo. Los medios de cultivo fueron los siguientes: M1) Murashige y Skoog (MS) fue suplementado con ácido ascórbico 100 mg/L y L-cisteina 2 mL/L, M2) Murashige y Skoog (MS) fue suplementado carbón activo 2 g/L, el M3) Murashige y Skoog (MS) suplementado con ácido ascórbico 100 mg/L y ácido cítrico100 mg/L. Las variables evaluadas fueron: La sobrevivencia de los explantes, donde se observó la contaminación y oxidación. Los resultados mostraron que en la primera fase de establecimiento, la mejor respuesta para la sobrevivencia de los explantes de plátano (Musa paradisiaca), fue con el medio de cultivo 3, donde se obtuvo un menor grado de oxidación (0.26) y la contaminación para todo los explantes fue de 28%.

This research was conducted at the Laboratory of Plant Biotechnology of the Department of Biological and Natural Sciences of the Amazonian University of Pando, in 2014. The aim of the study was to determine better culture medium in the establishment phase for propagation in vitro banana (Musa paradisiaca L.), 20 were selected and characterized mother plants NTRCA (New Technology Research Center Amazonia). A completely random design (CRD) with three different culture media was used. The culture media were M1) Murashige and Skoog (MS) was supplemented with ascorbic acid 100 mg/L and L-cysteine 2 ml /L, M2) Murashige and Skoog (MS) was supplemented charcoal 2 g/L, M3) Murashige and Skoog (MS) supplemented with ascorbic acid 100 mg/L and cítrico100 mg/L acid. The variables evaluated were: The survival of the former Plantes, where contamination and oxidation was observed. The results showed that in the first phase of establishment, the best answer for the survival of the former Plantes banana (Musa paradisiaca), was with the culture medium 3, where a lower degree of oxidation (0.26) and pollution for all explants was obtained was 28%.

Reflexiones sobre los efectos del cambio climático en la agricultura de Bolivia